Grazzi talli żort Nature.com. Il-verżjoni tal-browser li qed tuża għandha appoġġ limitat għas-CSS. Għal riżultati aħjar, nirrakkomandaw li tuża browser aktar ġdid (jew li tiddiżattiva l-modalità ta' kompatibilità fl-Internet Explorer). Sadanittant, biex niżguraw appoġġ kontinwu, se nuru s-sit mingħajr stili u JavaScript.
L-istabbiliment ta' mudelli fuq l-annimali ta' bidla modika (MC) huwa bażi importanti għall-istudju tal-MC. Erbgħa u ħamsin fenek abjad ta' New Zealand ġew maqsuma fi grupp ta' operazzjoni finta, grupp ta' impjantazzjoni tal-muskoli (grupp ME) u grupp ta' impjantazzjoni tan-nukleu pulposu (grupp NPE). Fil-grupp NPE, id-diska intervertebrali ġiet esposta permezz ta' approċċ kirurġiku lumbari anterolaterali u labra ntużat biex tittaqqab il-ġisem vertebrali L5 ħdejn il-pjanċa tat-tarf. NP ġiet estratta mid-diska intervertebrali L1/2 permezz ta' siringa u injettata fiha. Tħaffir ta' toqba fl-għadam subkondrali. Il-proċeduri kirurġiċi u l-metodi ta' tħaffir fil-grupp ta' impjantazzjoni tal-muskoli u l-grupp ta' operazzjoni finta kienu l-istess bħal dawk fil-grupp ta' impjantazzjoni NP. Fil-grupp ME, biċċa muskolu tqiegħdet fit-toqba, filwaqt li fil-grupp ta' operazzjoni finta, xejn ma tqiegħed fit-toqba. Wara l-operazzjoni, saru skannjar MRI u ttestjar bijoloġiku molekulari. Is-sinjal fil-grupp NPE nbidel, iżda ma kien hemm l-ebda bidla ovvja fis-sinjal fil-grupp ta' operazzjoni finta u l-grupp ME. L-osservazzjoni istoloġika wriet li ġiet osservata proliferazzjoni anormali tat-tessut fis-sit tal-impjantazzjoni, u l-espressjoni ta' IL-4, IL-17 u IFN-γ żdiedet fil-grupp NPE. L-impjantazzjoni ta' NP fl-għadam subkondrali tista' tifforma mudell tal-annimali ta' MC.
Bidliet modiċi (MC) huma leżjonijiet tal-pjanċi tat-tarf vertebrali u l-mudullun tal-għadam biswithom viżibbli fuq immaġini bir-reżonanza manjetika (MRI). Huma pjuttost komuni f'individwi b'sintomi assoċjati1. Ħafna studji enfasizzaw l-importanza tal-MC minħabba l-assoċjazzjoni tagħha ma' uġigħ fid-dahar t'isfel (LBP)2,3. de Roos et al.4 u Modic et al.5 b'mod indipendenti l-ewwel iddeskrivew tliet tipi differenti ta' anormalitajiet tas-sinjali subkondrali fil-mudullun tal-għadam vertebrali. Bidliet modiċi tat-tip I huma ipointensi fuq sekwenzi ppeżati b'T1 (T1W) u iperintensi fuq sekwenzi ppeżati b'T2 (T2W). Din il-leżjoni tiżvela pjanċi tat-tarf tal-fissuri u tessut ta' granulazzjoni vaskulari biswithom fil-mudullun tal-għadam. Bidliet modiċi tat-tip II juru sinjal għoli kemm fuq sekwenzi T1W kif ukoll T2W. F'dan it-tip ta' leżjoni, tista' tinstab qerda tal-pjanċi tat-tarf, kif ukoll sostituzzjoni istoloġika tax-xaħam tal-mudullun tal-għadam biswithom. Bidliet modiċi tat-tip III juru sinjal baxx fis-sekwenzi T1W u T2W. Ġew osservati leżjonijiet sklerotiċi li jikkorrispondu mal-pjanċi tat-tarf6. L-MC hija kkunsidrata bħala marda patoloġika tas-sinsla tad-dahar u hija assoċjata mill-qrib ma' ħafna mard deġenerattiv tas-sinsla tad-dahar7,8,9.
Meta wieħed iqis id-dejta disponibbli, diversi studji pprovdew għarfien dettaljat dwar l-etjoloġija u l-mekkaniżmi patoloġiċi tal-MC. Albert et al. issuġġerew li l-MC tista' tkun ikkawżata minn ernja tad-diska8. Hu et al. attribwew l-MC għal deġenerazzjoni severa tad-diska10. Kroc ippropona l-kunċett ta' "qsim intern tad-diska," li jiddikjara li trawma ripetittiva tad-diska tista' twassal għal mikrotiċrit fl-endplate. Wara l-formazzjoni ta' qasma, il-qerda tal-endplate min-nukleu pulposu (NP) tista' twassal għal rispons awtoimmuni, li jwassal aktar għall-iżvilupp ta' MC11. Ma et al. qasmu opinjoni simili u rrappurtaw li l-awtoimmunità indotta minn NP għandha rwol ewlieni fil-patoġenesi ta' MC12.
Iċ-ċelloli tas-sistema immunitarja, speċjalment il-limfoċiti T helper CD4+, għandhom rwol kritiku fil-patoġenesi tal-awtoimmunità13. Is-subset Th17 skopert reċentement jipproduċi ċ-ċitokina proinfjammatorja IL-17, jippromwovi l-espressjoni tal-kemokini, u jistimula ċ-ċelloli T f'organi bil-ħsara biex jipproduċu IFN-γ14. Iċ-ċelloli Th2 għandhom ukoll rwol uniku fil-patoġenesi tar-risponsi immuni. L-espressjoni ta' IL-4 bħala ċellula Th2 rappreżentattiva tista' twassal għal konsegwenzi immunopatoloġiċi severi15.
Għalkemm saru ħafna studji kliniċi fuq l-MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, għad hemm nuqqas ta’ mudelli sperimentali fuq l-annimali adattati li jistgħu jimitaw il-proċess tal-MC li jseħħ ta’ spiss fil-bnedmin u li jistgħu jintużaw biex jinvestigaw l-etjoloġija jew trattamenti ġodda bħat-terapija mmirata. Sal-lum, ġew irrappurtati biss ftit mudelli fuq l-annimali tal-MC li jistudjaw il-mekkaniżmi patoloġiċi sottostanti.
Abbażi tat-teorija awtoimmuni proposta minn Albert u Ma, dan l-istudju stabbilixxa mudell MC tal-fenek sempliċi u riproduċibbli billi awtotrapjanta NP ħdejn il-pjanċa tat-tarf vertebrali mtaqqba. Objettivi oħra huma li jiġu osservati l-karatteristiċi istoloġiċi tal-mudelli tal-annimali u jiġu evalwati l-mekkaniżmi speċifiċi ta' NP fl-iżvilupp tal-MC. Għal dan il-għan, nużaw tekniki bħall-bijoloġija molekulari, l-MRI, u studji istoloġiċi biex nistudjaw il-progressjoni tal-MC.
Żewġ fniek mietu minħabba fsada waqt l-operazzjoni, u erba’ fniek mietu waqt l-anestesija waqt l-MRI. It-48 fenek li fadal baqgħu ħajjin u ma wrew l-ebda sinjali ta’ mġiba jew newroloġiċi wara l-operazzjoni.
L-MRI turi li l-intensità tas-sinjal tat-tessut inkorporat f'toqob differenti hija differenti. L-intensità tas-sinjal tal-ġisem vertebrali L5 fil-grupp NPE nbidlet gradwalment fi 12, 16 u 20 ġimgħa wara l-inserzjoni (is-sekwenza T1W uriet sinjal baxx, u s-sekwenza T2W uriet sinjal imħallat flimkien ma' sinjal baxx) (Fig. 1C), filwaqt li d-dehra tal-MRI taż-żewġ gruppi l-oħra ta' partijiet inkorporati baqgħet relattivament stabbli matul l-istess perjodu (Fig. 1A, B).
(A) MRIs sekwenzjali rappreżentattivi tas-sinsla lumbari tal-fenek fi 3 punti ta' żmien. Ma nstabu l-ebda anormalitajiet fis-sinjali fl-immaġini tal-grupp ta' operazzjoni finta. (B) Il-karatteristiċi tas-sinjali tal-ġisem vertebrali fil-grupp ME huma simili għal dawk fil-grupp ta' operazzjoni finta, u ma ġiet osservata l-ebda bidla sinifikanti fis-sinjal fis-sit tal-inkorporazzjoni maż-żmien. (Ċ) Fil-grupp NPE, is-sinjal baxx huwa viżibbli b'mod ċar fis-sekwenza T1W, u s-sinjal imħallat u s-sinjal baxx huma viżibbli b'mod ċar fis-sekwenza T2W. Mill-perjodu ta' 12-il ġimgħa sal-perjodu ta' 20 ġimgħa, is-sinjali għoljin sporadiċi li jdawru s-sinjali baxxi fis-sekwenza T2W jonqsu.
Iperplażja ovvja tal-għadam tista' tidher fis-sit tal-impjantazzjoni tal-ġisem vertebrali fil-grupp NPE, u l-iperplażja tal-għadam isseħħ aktar malajr minn 12 sa 20 ġimgħa (Fig. 2C) meta mqabbla mal-grupp NPE, l-ebda bidla sinifikanti ma hija osservata fil-ġisem vertebrali mmudellat; grupp Sham u grupp ME (Fig. 2C) 2A,B).
(A) Il-wiċċ tal-ġisem vertebrali fil-porzjon impjantat huwa lixx ħafna, it-toqba tfiq sew, u m'hemm l-ebda iperplażja fil-ġisem vertebrali. (B) Il-forma tas-sit impjantat fil-grupp ME hija simili għal dik fil-grupp ta' operazzjoni finta, u m'hemm l-ebda bidla ovvja fid-dehra tas-sit impjantat maż-żmien. (Ċ) Iperplażja tal-għadam seħħet fis-sit impjantat fil-grupp NPE. L-iperplażja tal-għadam żdiedet malajr u saħansitra estendiet mid-diska intervertebrali sal-ġisem vertebrali kontralaterali.
L-analiżi istoloġika tipprovdi informazzjoni aktar dettaljata dwar il-formazzjoni tal-għadam. Il-Figura 3 turi r-ritratti tas-sezzjonijiet ta’ wara l-operazzjoni mtebbgħin b’H&E. Fil-grupp ta’ operazzjoni finta, il-kondroċiti kienu rranġati tajjeb u ma nstabet l-ebda proliferazzjoni taċ-ċelluli (Fig. 3A). Is-sitwazzjoni fil-grupp ME kienet simili għal dik fil-grupp ta’ operazzjoni finta (Fig. 3B). Madankollu, fil-grupp NPE, ġie osservat numru kbir ta’ kondroċiti u proliferazzjoni ta’ ċelluli simili għal NP fis-sit tal-impjantazzjoni (Fig. 3C);
(A) It-trabekuli jistgħu jidhru ħdejn il-pjanċa tat-tarf, il-kondroċiti huma rranġati pulit b'daqs u forma uniformi taċ-ċelluli u mingħajr proliferazzjoni (40 darba). (B) Il-kundizzjoni tas-sit tal-impjantazzjoni fil-grupp ME hija simili għal dik tal-grupp finta. It-trabekuli u l-kondroċiti jistgħu jidhru, iżda m'hemm l-ebda proliferazzjoni ovvja fis-sit tal-impjantazzjoni (40 darba). (B) Jista' jidher li l-kondroċiti u ċ-ċelluli simili għal NP jipproliferaw b'mod sinifikanti, u l-forma u d-daqs tal-kondroċiti mhumiex uniformi (40 darba).
L-espressjoni tal-mRNA tal-interleukin 4 (IL-4), l-mRNA tal-interleukin 17 (IL-17), u l-mRNA tal-interferon γ (IFN-γ) ġiet osservata kemm fil-grupp NPE kif ukoll f'dak ME. Meta l-livelli ta' espressjoni tal-ġeni fil-mira tqabblu, l-espressjonijiet tal-ġeni ta' IL-4, IL-17, u IFN-γ żdiedu b'mod sinifikanti fil-grupp NPE meta mqabbla ma' dawk tal-grupp ME u l-grupp ta' operazzjoni finta (Fig. 4) (P < 0.05). Meta mqabbla mal-grupp ta' operazzjoni finta, il-livelli ta' espressjoni ta' IL-4, IL-17, u IFN-γ fil-grupp ME żdiedu biss ftit u ma laħqux bidla statistika (P > 0.05).
L-espressjoni tal-mRNA ta' IL-4, IL-17 u IFN-γ fil-grupp NPE wriet xejra sinifikament ogħla minn dawk fil-grupp ta' operazzjoni finta u l-grupp ME (P < 0.05).
B'kuntrast, il-livelli ta' espressjoni fil-grupp ME ma wrew l-ebda differenza sinifikanti (P>0.05).
Twettgħet analiżi tal-Western blot bl-użu ta' antikorpi disponibbli kummerċjalment kontra IL-4 u IL-17 biex tikkonferma l-mudell mibdul ta' espressjoni tal-mRNA. Kif muri fil-Figuri 5A,B, meta mqabbla mal-grupp ME u l-grupp ta' operazzjoni finta, il-livelli ta' proteini ta' IL-4 u IL-17 fil-grupp NPE żdiedu b'mod sinifikanti (P < 0.05). Meta mqabbla mal-grupp ta' operazzjoni finta, il-livelli ta' proteini ta' IL-4 u IL-17 fil-grupp ME lanqas ma rnexxilhom jilħqu bidliet statistikament sinifikanti (P> 0.05).
(A) Il-livelli ta' proteini ta' IL-4 u IL-17 fil-grupp NPE kienu sinifikament ogħla minn dawk fil-grupp ME u l-grupp plaċebo (P < 0.05). (B) Istogramma tal-Western blot.
Minħabba n-numru limitat ta' kampjuni umani miksuba waqt il-kirurġija, studji ċari u dettaljati dwar il-patoġenesi tal-MC huma kemmxejn diffiċli. Ippruvajna nistabbilixxu mudell tal-annimali tal-MC biex nistudjaw il-mekkaniżmi patoloġiċi potenzjali tagħha. Fl-istess ħin, intużaw evalwazzjoni radjoloġika, evalwazzjoni istoloġika u evalwazzjoni bijoloġika molekulari biex isegwu l-kors tal-MC ikkaġunata minn awtotrapjant NP. Bħala riżultat, il-mudell ta' impjantazzjoni NP irriżulta f'bidla gradwali fl-intensità tas-sinjal minn punti ta' żmien ta' 12-il ġimgħa għal 20 ġimgħa (sinjal baxx imħallat f'sekwenzi T1W u sinjal baxx f'sekwenzi T2W), li jindika bidliet fit-tessuti, u l-evalwazzjonijiet istoloġiċi u bijoloġiċi molekulari kkonfermaw ir-riżultati tal-istudju radjoloġiku.
Ir-riżultati ta’ dan l-esperiment juru li seħħew bidliet viżwali u istoloġiċi fis-sit tal-ksur tal-ġisem vertebrali fil-grupp NPE. Fl-istess ħin, ġiet osservata l-espressjoni tal-ġeni IL-4, IL-17 u IFN-γ, kif ukoll IL-4, IL-17 u IFN-γ, li jindika li l-ksur tat-tessut awtologu tan-nukleu pulposu fil-ġisem vertebrali jista’ jikkawża serje ta’ bidliet fis-sinjali u morfoloġiċi. Huwa faċli li wieħed isib li l-karatteristiċi tas-sinjali tal-ġisem vertebrali tal-mudell tal-annimal (sinjal baxx fis-sekwenza T1W, sinjal imħallat u sinjal baxx fis-sekwenza T2W) huma simili ħafna għal dawk taċ-ċelloli vertebrali umani, u l-karatteristiċi tal-MRI jikkonfermaw ukoll l-osservazzjonijiet tal-istoloġija u l-anatomija grossa, jiġifieri, il-bidliet fiċ-ċelloli tal-ġisem vertebrali huma progressivi. Għalkemm ir-rispons infjammatorju kkawżat minn trawma akuta jista’ jidher ftit wara t-titqib, ir-riżultati tal-MRI wrew li bidliet fis-sinjali li jiżdiedu progressivament dehru 12-il ġimgħa wara t-titqib u ppersistew sa 20 ġimgħa mingħajr ebda sinjal ta’ rkupru jew treġġigħ lura tal-bidliet fl-MRI. Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li NP vertebrali awtologa hija metodu affidabbli biex tiġi stabbilita MV progressiva fil-fniek.
Dan il-mudell ta’ titqib jirrikjedi ħila, ħin u sforz kirurġiku adegwati. F’esperimenti preliminari, id-dissezzjoni jew l-istimulazzjoni eċċessiva tal-istrutturi ligamentożi paravertebrali jistgħu jirriżultaw fil-formazzjoni ta’ osteofiti vertebrali. Għandha tingħata attenzjoni biex ma ssirx ħsara jew irritazzjoni lid-diski biswit. Peress li l-fond tal-penetrazzjoni jrid jiġi kkontrollat biex jinkisbu riżultati konsistenti u riproduċibbli, għamilna tapp manwalment billi qtajna l-għant ta’ labra twila 3 mm. L-użu ta’ dan it-tapp jiżgura fond uniformi tat-tħaffir fil-ġisem vertebrali. F’esperimenti preliminari, tliet kirurgi ortopediċi involuti fl-operazzjoni sabu li labar ta’ 16-il gauge huma aktar faċli biex jintużaw milli labar ta’ 18-il gauge jew metodi oħra. Biex tiġi evitata fsada eċċessiva waqt it-tħaffir, iż-żamma tal-labra wieqfa għal ftit żmien tipprovdi toqba ta’ inserzjoni aktar adattata, li tissuġġerixxi li ċertu grad ta’ MC jista’ jiġi kkontrollat b’dan il-mod.
Għalkemm ħafna studji mmiraw lejn l-MC, ftit li xejn huwa magħruf dwar l-etjoloġija u l-patoġenesi tal-MC25,26,27. Abbażi tal-istudji preċedenti tagħna, sibna li l-awtoimmunità għandha rwol ewlieni fl-okkorrenza u l-iżvilupp tal-MC12. Dan l-istudju eżamina l-espressjoni kwantitattiva ta' IL-4, IL-17, u IFN-γ, li huma l-mogħdijiet ewlenin ta' differenzjazzjoni taċ-ċelloli CD4+ wara stimulazzjoni tal-antiġen. Fl-istudju tagħna, meta mqabbel mal-grupp negattiv, il-grupp NPE kellu espressjoni ogħla ta' IL-4, IL-17, u IFN-γ, u l-livelli ta' proteini ta' IL-4 u IL-17 kienu wkoll ogħla.
Klinikament, l-espressjoni tal-mRNA tal-IL-17 tiżdied fiċ-ċelloli NP minn pazjenti b'ernja tad-diska28. Livelli miżjuda ta' espressjoni ta' IL-4 u IFN-γ instabu wkoll f'mudell ta' ernja tad-diska akuta mhux kompressiva meta mqabbel ma' kontrolli b'saħħithom29. L-IL-17 għandu rwol ewlieni fl-infjammazzjoni, il-ħsara fit-tessuti f'mard awtoimmuni30 u jtejjeb ir-rispons immuni għall-IFN-γ31. Ġiet irrappurtata ħsara fit-tessuti medjata mill-IL-17 imsaħħa fil-ġrieden MRL/lpr32 u fil-ġrieden suxxettibbli għall-awtoimmunità33. L-IL-4 jista' jinibixxi l-espressjoni ta' ċitokini proinfjammatorji (bħal IL-1β u TNFα) u l-attivazzjoni tal-makrofaġi34. Ġie rrappurtat li l-espressjoni tal-mRNA tal-IL-4 kienet differenti fil-grupp NPE meta mqabbla ma' IL-17 u IFN-γ fl-istess punt ta' żmien; L-espressjoni tal-mRNA tal-IFN-γ fil-grupp NPE kienet sinifikament ogħla minn dik fil-gruppi l-oħra. Għalhekk, il-produzzjoni tal-IFN-γ tista' tkun medjatur tar-rispons infjammatorju kkaġunat mill-interkalazzjoni tal-NP. Studji wrew li l-IFN-γ huwa prodott minn diversi tipi ta’ ċelluli, inklużi ċelluli T helper tat-tip 1 attivati, ċelluli qattiela naturali, u makrofaġi35,36, u huwa ċitokina pro-infjammatorja ewlenija li tippromwovi risponsi immuni37.
Dan l-istudju jissuġġerixxi li r-rispons awtoimmuni jista' jkun involut fl-okkorrenza u l-iżvilupp tal-MC. Luoma et al. sabu li l-karatteristiċi tas-sinjal tal-MC u l-NP prominenti huma simili fuq l-MRI, u t-tnejn juru sinjal għoli fis-sekwenza T2W38. Xi ċitokini ġew ikkonfermati li huma assoċjati mill-qrib mal-okkorrenza tal-MC, bħal IL-139. Ma et al. issuġġerew li l-isporġenza 'l fuq jew 'l isfel tal-NP jista' jkollha influwenza kbira fuq l-okkorrenza u l-iżvilupp tal-MC12. Bobechko40 u Herzbein et al.41 irrappurtaw li l-NP huwa tessut immunotolleranti li ma jistax jidħol fiċ-ċirkolazzjoni vaskulari mit-twelid. L-isporġenzi tal-NP jintroduċu korpi barranin fil-provvista tad-demm, u b'hekk jimmedjaw reazzjonijiet awtoimmuni lokali42. Ir-reazzjonijiet awtoimmuni jistgħu jinduċu numru kbir ta' fatturi immuni, u meta dawn il-fatturi jkunu esposti kontinwament għat-tessuti, jistgħu jikkawżaw bidliet fis-sinjalar43. F'dan l-istudju, l-espressjoni żejda ta' IL-4, IL-17 u IFN-γ huma fatturi immuni tipiċi, li jippruvaw aktar ir-relazzjoni mill-qrib bejn l-NP u l-MCs44. Dan il-mudell tal-annimali jimita tajjeb il-penetrazzjoni tal-NP u d-dħul fil-pjanċa tat-tarf. Dan il-proċess wera aktar l-impatt tal-awtoimmunità fuq l-MC.
Kif mistenni, dan il-mudell tal-annimali jipprovdilna pjattaforma possibbli biex nistudjaw l-MC. Madankollu, dan il-mudell għad għandu xi limitazzjonijiet: l-ewwelnett, matul il-fażi ta' osservazzjoni tal-annimali, xi fniek fi stadju intermedju jeħtieġ li jiġu ewtanizzati għal testijiet istologiċi u tal-bijoloġija molekulari, u għalhekk xi annimali "ma jibqgħux jintużaw" maż-żmien. It-tieni nett, għalkemm tliet punti ta' żmien huma stabbiliti f'dan l-istudju, sfortunatament, immudellajna tip wieħed biss ta' MC (bidla tat-tip Modic I), għalhekk mhux biżżejjed biex jirrappreżenta l-proċess tal-iżvilupp tal-marda umana, u jeħtieġ li jiġu stabbiliti aktar punti ta' żmien biex jiġu osservati aħjar il-bidliet kollha tas-sinjal. It-tielet nett, il-bidliet fl-istruttura tat-tessut jistgħu tabilħaqq jintwerew b'mod ċar permezz ta' tebgħa istoloġika, iżda xi tekniki speċjalizzati jistgħu jiżvelaw aħjar il-bidliet mikrostrutturali f'dan il-mudell. Pereżempju, il-mikroskopija tad-dawl polarizzat intużat biex tanalizza l-formazzjoni tal-fibrokartilaġni fid-diski intervertebrali tal-fenek45. L-effetti fit-tul tal-NP fuq l-MC u l-endplate jeħtieġu aktar studju.
Erbgħa u ħamsin fenek abjad maskili minn New Zealand (piż ta’ madwar 2.5-3 kg, età ta’ 3-3.5 xhur) ġew maqsuma b’mod każwali fi grupp ta’ operazzjoni finta, grupp ta’ impjantazzjoni tal-muskoli (grupp ME) u grupp ta’ impjantazzjoni tal-għeruq tan-nervituri (grupp NPE). Il-proċeduri sperimentali kollha ġew approvati mill-Kumitat tal-Etika tal-Isptar ta’ Tianjin, u l-metodi sperimentali twettqu f’konformità stretta mal-linji gwida approvati.
Saru xi titjib fit-teknika kirurġika ta' S. Sobajima 46. Kull fenek tqiegħed f'pożizzjoni ta' mimdud laterali u l-wiċċ ta' quddiem ta' ħames diski intervertebrali lumbari (IVDs) konsekuttivi ġie espost bl-użu ta' approċċ retroperitoneali posterolaterali. Kull fenek ingħata anestesija ġenerali (20% uretan, 5 ml/kg permezz tal-vina tal-widna). Saret inċiżjoni lonġitudinali tal-ġilda mit-tarf t'isfel tal-kustilji sat-tarf tal-pelvi, 2 ċm ventrali għall-muskoli paravertebrali. Is-sinsla anterolaterali tal-lemin minn L1 sa L6 ġiet esposta permezz ta' dissezzjoni qawwija u ċatta tat-tessut ta' taħt il-ġilda, it-tessut retroperitoneali, u l-muskoli ta' fuq (Fig. 6A). Il-livell tad-diska ġie determinat bl-użu tat-tarf tal-pelvi bħala punt ta' riferiment anatomiku għal-livell tad-diska L5-L6. Uża labra tat-titqib ta' 16-il gauge biex tħaffer toqba ħdejn il-pjanċa tat-tarf tal-vertebra L5 sa fond ta' 3 mm (Fig. 6B). Uża siringa ta' 5 ml biex taspira n-nukleu pulposu awtologu fid-diska intervertebrali L1-L2 (Fig. 6C). Neħħi n-nukleu pulposu jew il-muskolu skont ir-rekwiżiti ta' kull grupp. Wara li t-toqba tat-tħaffir tiddaħħal aktar fil-fond, jitqiegħdu suturi assorbibbli fuq il-fascia fonda, il-fascia superfiċjali u l-ġilda, filwaqt li tingħata attenzjoni biex ma ssirx ħsara lit-tessut perjostali tal-ġisem vertebrali waqt il-kirurġija.
(A) Id-diska L5–L6 hija esposta permezz ta' approċċ retroperitoneali posterolaterali. (B) Uża labra ta' kejl 16 biex tħaffer toqba ħdejn il-pjanċa tat-tarf L5. (Ċ) L-MFs awtologi huma miġbura.
Ingħatat anestesija ġenerali b'20% uretan (5 ml/kg) mogħti permezz tal-vina tal-widna, u r-radjografi tas-sinsla lumbari ġew ripetuti 12, 16, u 20 ġimgħa wara l-operazzjoni.
Il-fniek ġew sagrifikati permezz ta' injezzjoni ġol-muskoli ta' ketamina (25.0 mg/kg) u sodium pentobarbital ġol-vini (1.2 g/kg) fi 12, 16 u 20 ġimgħa wara l-kirurġija. Is-sinsla kollha tneħħiet għal analiżi istoloġika u twettqet analiżi reali. Traskrizzjoni inversa kwantitattiva (RT-qPCR) u Western blotting intużaw biex jinstabu bidliet fil-fatturi immuni.
L-eżamijiet tal-MRI twettqu fil-fniek bl-użu ta' kalamita klinika ta' 3.0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) mgħammra b'riċevitur ortogonali tal-koljatura tar-riġlejn. Il-fniek ġew anestetizzati b'20% uretan (5 mL/kg) permezz tal-vina tal-widna u mbagħad imqiegħda supina fil-kalamita bir-reġjun lumbari ċċentrat fuq kolja tal-wiċċ ċirkolari b'dijametru ta' 5 pulzieri (GE Medical Systems). Inkisbu immaġini tal-lokalizzatur koronali T2-weighted (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) biex jiddefinixxu l-post tad-diska lumbari minn L3–L4 sa L5–L6. Inkisbu sezzjonijiet T2-weighted tal-pjan sagittali bis-settings li ġejjin: sekwenza spin-echo mgħaġġla b'ħin ta' ripetizzjoni (TR) ta' 2200 ms u ħin ta' eku (TE) ta' 70 ms, matriċi; kamp viżiv ta' 260 u tmien stimuli; Il-ħxuna tat-tqattigħ kienet ta' 2 mm, id-distakk kien ta' 0.2 mm.
Wara li ttieħdet l-aħħar ritratt u nqatel l-aħħar fenek, id-diski finti, dawk inkorporati fil-muskoli, u dawk NP tneħħew għal eżami istoloġiku. It-tessuti ġew iffissati f'10% formalin newtralment buffered għal ġimgħa, dekalċifikati b'aċidu etilendiamintetraaċetiku, u sezzjonati bil-paraffina. Il-blokki tat-tessut ġew inkorporati fil-paraffina u maqtugħin f'sezzjonijiet sagittali (5 μm ħxuna) bl-użu ta' mikrotomu. Is-sezzjonijiet ġew imtebbgħin b'ematoxylin u eosin (H&E).
Wara li nġabru d-diski intervertebrali mill-fniek f'kull grupp, l-RNA totali ġie estratt bl-użu ta' kolonna UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., iċ-Ċina) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur u sistema ta' traskrizzjoni inversa ImProm II (Promega Inc., Madison, WI, l-Istati Uniti). Twettqet traskrizzjoni inversa.
RT-qPCR twettaq bl-użu ta' Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) u SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Il-volum tar-reazzjoni tal-PCR kien ta' 20 μl u kien fih 1.5 μl ta' cDNA dilwit u 0.2 μM ta' kull primer. Il-primers ġew iddisinjati minn OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) u manifatturati minn Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (iċ-Ċina) (Tabella 1). Intużaw il-kundizzjonijiet taċ-ċikliżmu termali li ġejjin: pass inizjali ta' attivazzjoni tal-polimerażi f'94°C għal 2 minuti, imbagħad 40 ċiklu ta' 15-il sekonda kull wieħed f'94°C għad-denaturazzjoni tat-template, annealing għal minuta f'60°C, estensjoni, u fluworexxenza. Il-kejl sar għal minuta f'72°C. Il-kampjuni kollha ġew amplifikati tliet darbiet u l-valur medju ntuża għall-analiżi RT-qPCR. Id-dejta tal-amplifikazzjoni ġiet analizzata bl-użu ta' FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). L-espressjoni tal-ġeni IL-4, IL-17, u IFN-γ ġiet normalizzata għall-kontroll endoġenu (ACTB). Il-livelli ta' espressjoni relattivi tal-mRNA fil-mira ġew ikkalkulati bl-użu tal-metodu 2-ΔΔCT.
Il-proteina totali ġiet estratta mit-tessuti bl-użu ta' omoġenizzatur tat-tessuti f'buffer tal-liżi RIPA (li fih cocktail ta' inibituri tal-protease u l-fosfatase) u mbagħad ġiet ċentrifugata bi 13,000 rpm għal 20 minuta f'4°C biex jitneħħew il-fdalijiet tat-tessuti. Ħamsin mikrogramma ta' proteina ġew mgħobbija għal kull korsija, separati b'10% SDS-PAGE, u mbagħad trasferiti għal membrana PVDF. L-imblukkar sar f'ħalib niexef mingħajr xaħam ta' 5% f'salina Tris-buffered (TBS) li fiha 0.1% Tween 20 għal siegħa f'temperatura tal-kamra. Il-membrana ġiet inkubata b'antikorp primarju tal-fenek anti-decorin (dilwit 1:200; Boster, Wuhan, iċ-Ċina) (dilwit 1:200; Bioss, Beijing, iċ-Ċina) matul il-lejl f'4°C u rreaġixxiet fit-tieni jum; b'antikorp sekondarju (immunoglobulina G tal-mogħża kontra l-fenek f'dilwizzjoni ta' 1:40,000) flimkien ma' perossidasi tal-horseradish (Boster, Wuhan, iċ-Ċina) għal siegħa f'temperatura tal-kamra. Is-sinjali tal-Western blot ġew skoperti permezz ta' żieda fil-kemiluminexxenza fuq il-membrana kemiluminexxenti wara irradjazzjoni bir-raġġi-X. Għall-analiżi densitometrika, il-blots ġew skenjati u kwantifikati bl-użu tas-softwer BandScan u r-riżultati ġew espressi bħala l-proporzjon tal-immunoreattività tal-ġene fil-mira għall-immunoreattività tat-tubulina.
Il-kalkoli statistiċi twettqu bl-użu tal-pakkett tas-softwer SPSS16.0 (SPSS, USA). Id-dejta miġbura matul l-istudju ġiet espressa bħala medja ± devjazzjoni standard (medja ± SD) u analizzata bl-użu tal-analiżi tal-varjanza b'miżuri ripetuti f'direzzjoni waħda (ANOVA) biex jiġu ddeterminati d-differenzi bejn iż-żewġ gruppi. P < 0.05 kien ikkunsidrat statistikament sinifikanti.
Għalhekk, l-istabbiliment ta' mudell tal-annimali ta' MC billi jiġu impjantati NPs awtologi fil-ġisem vertebrali u titwettaq osservazzjoni makroanatomika, analiżi tal-MRI, evalwazzjoni istoloġika u analiżi bijoloġika molekulari jista' jsir għodda importanti għall-valutazzjoni u l-fehim tal-mekkaniżmi tal-MC umana u l-iżvilupp ta' interventi terapewtiċi ġodda.
Kif tiċċita dan l-artiklu: Han, C. et al. Mudell tal-annimali tal-bidliet Modic ġie stabbilit billi ġie impjantat nukleu pulposu awtologu fl-għadma subkondrali tas-sinsla lumbari. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., u Boos, N. Immaġini bir-reżonanza manjetika tas-sinsla lumbari: prevalenza ta' ernja u żamma tad-diska, kompressjoni tal-għeruq tan-nervituri, anormalitajiet tal-pjanċa tat-tarf, u osteoartrite tal-ġogi tal-faċċetti f'voluntiera asintomatiċi. rata. Radjoloġija 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, u Leboeuf-Eed, K. Tibdiliet modiċi u r-relazzjoni tagħhom mas-sejbiet kliniċi. European Spine Journal: pubblikazzjoni uffiċjali tas-Soċjetà Ewropea tas-Sinsla, is-Soċjetà Ewropea tad-Deformità Spinali, u s-Soċjetà Ewropea għar-Riċerka tas-Sinsla Ċervikali 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Tibdil modiku fil-pjanċi vertebrali lumbari: prevalenza u assoċjazzjoni ma' uġigħ fin-naħa t'isfel tad-dahar u xjatika f'ħaddiema rġiel ta' età medja. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., u Dalinka, M. MRI ta' bidliet fil-mudullun ħdejn il-pjanċa tat-tarf f'mard deġenerattiv tas-sinsla lumbari. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, u Carter, JR Mard deġenerattiv tad-diska: evalwazzjoni tal-bidliet fil-mudullun vertebrali bl-MRI. Radjoloġija 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, u Carter, JR Immaġini ta' mard deġenerattiv tad-diska. Radjoloġija 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Predikaturi ta' sinjali ta' bidliet fil-pjanċa neovertebrali (Modic) fil-popolazzjoni ġenerali. European Spine Journal: Pubblikazzjoni Uffiċjali tas-Soċjetà Ewropea tas-Sinsla, is-Soċjetà Ewropea tad-Deformità Spinali, u s-Soċjetà Ewropea għar-Riċerka tas-Sinsla Ċervikali, Diviżjoni 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB u Mannisch, K. Tibdiliet modiċi wara herniazzjoni tad-diska lumbari. European Spine Journal: Pubblikazzjoni Uffiċjali tas-Soċjetà Ewropea tas-Sinsla, is-Soċjetà Ewropea tad-Deformità Spinali u s-Soċjetà Ewropea għar-Riċerka tas-Sinsla Ċervikali 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., u Kaapa, E. Bidliet fit-tip Modic I jistgħu jbassru deġenerazzjoni tad-diska deformazzjonali progressiva malajr: studju prospettiv ta' sena. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ u Fan, SW Bidliet modiċi: kawżi possibbli u kontribut għad-deġenerazzjoni tad-diska lumbari. Ipoteżi Mediċi 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Tifqigħ tad-diska interna. Problemi ta' prolapse tad-diska fuq aktar minn 50 sena. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Ħin tal-posta: 13 ta' Diċembru 2024