Grazzi talli żort Nature.com. Il-verżjoni tal-browser li qed tuża għandha appoġġ CSS limitat. Għall-aħjar riżultati, nirrakkomandaw li tuża browser aktar ġdid (jew modalità ta 'kompatibilità li tiddiżattiva fl-Internet Explorer). Sadanittant, biex niżguraw l-appoġġ kontinwu, aħna nuru s-sit mingħajr stili u JavaScript.
L-istabbiliment ta 'mudelli ta' annimali ta 'bidla modika (MC) huwa bażi importanti għall-istudju ta' MC. Erbgħa u ħamsin fniek bojod ta 'New Zealand ġew maqsuma fi grupp ta' operazzjoni fittizja, grupp ta 'impjantazzjoni tal-muskoli (grupp ME) u grupp ta' impjantazzjoni ta 'nukleu pulposus (grupp NPE). Fil-grupp NPE, id-diska intervertebrali kienet esposta minn approċċ kirurġiku tal-ġenbejn anterolaterali u labra ntużat biex tittaqqab il-korp vertebrali L5 ħdejn il-pjanċa tat-tarf. L-NP ġie estratt mid-diska intervertebrali L1 / 2 permezz ta 'siringa u injettat fiha. Tħaffir ta 'toqba fl-għadam subkondrali. Il-proċeduri kirurġiċi u l-metodi ta 'tħaffir fil-grupp ta' impjantazzjoni tal-muskoli u l-grupp ta 'operazzjoni fittizja kienu l-istess bħal dawk fil-grupp ta' impjantazzjoni NP. Fil-grupp ME, biċċa muskolu tqiegħdet fit-toqba, waqt li fil-grupp ta 'operazzjoni fittizja, xejn ma tqiegħed fit-toqba. Wara l-operazzjoni, saru l-iskannjar tal-MRI u l-ittestjar bijoloġiku molekulari. Is-sinjal fil-grupp NPE inbidel, iżda ma kien hemm l-ebda bidla ovvja tas-sinjal fil-grupp ta 'operazzjoni fittizja u fil-grupp ME. L-osservazzjoni istoloġika wriet li ġiet osservata proliferazzjoni anormali tat-tessuti fis-sit ta 'l-impjantazzjoni, u l-espressjoni ta' IL-4, IL-17 u IFN-γ kienet miżjuda fil-grupp NPE. L-impjantazzjoni ta 'NP fl-għadam subkondrali tista' tifforma mudell ta 'annimali ta' MC.
Bidliet modiċi (MC) huma leżjonijiet tal-pjanċi vertebrali u tal-mudullun li jmissu magħhom viżibbli fuq immaġni ta 'reżonanza manjetika (MRI). Huma pjuttost komuni f'individwi b'sintomi assoċjati1. Ħafna studji enfasizzaw l-importanza tal-MC minħabba l-assoċjazzjoni tagħha ma 'uġigħ fid-dahar baxx (LBP) 2,3. De Roos et al.4 u Modic et al.5 indipendentement iddeskrivew tliet tipi differenti ta 'anormalitajiet tas-sinjal subkondrali fil-mudullun vertebrali. Il-bidliet modiċi tat-tip I huma hypointense fuq sekwenzi ta 'T1 (T1W) u iperintensi fuq sekwenzi ta' T2 (T2W). Din il-leżjoni tikxef pjanċi tal-fissura u tessut tal-granulazzjoni vaskulari li jmissu magħhom fil-mudullun. Il-bidliet modiċi tat-tip II juru sinjal għoli kemm fuq sekwenzi T1W u T2W. F’dan it-tip ta ’leżjoni, tista’ tinstab qerda endplate, kif ukoll sostituzzjoni xaħma istoloġika tal-mudullun li jmissu magħhom. Il-bidliet modiċi tat-tip III juru sinjal baxx fis-sekwenzi T1W u T2W. Ġew osservati leżjonijiet sklerotiċi li jikkorrispondu għall-pjanċi tat-tarf. MC huwa meqjus bħala marda patoloġika ta 'l-ispina u huwa assoċjat mill-qrib ma' ħafna mard deġenerattiv ta 'l-ispina7,8,9.
Meta wieħed iqis id-dejta disponibbli, bosta studji pprovdew għarfien dettaljat dwar l-etjoloġija u l-mekkaniżmi patoloġiċi ta 'MC. Albert et al. issuġġerixxa li l-MC jista 'jkun ikkawżat minn herniation tad-diska8. Hu et al. attribwit MC għal deġenerazzjoni severa tad-diska10. KROC ippropona l-kunċett ta '"ftuħ tad-diska interna", li jiddikjara li trawma ta' diska ripetittiva tista 'twassal għal mikrotears fil-pjanċa tat-tarf. Wara l-formazzjoni ta 'qasma, il-qerda tal-pjanċa min-nukleu pulposus (NP) tista' tikkawża rispons awtoimmuni, li jkompli jwassal għall-iżvilupp ta 'MC11. Ma et al. Qassam fehma simili u rrappurtat li l-awtoimmunità indotta mill-NP għandha rwol ewlieni fil-patoġenesi ta 'MC12.
Iċ-ċelloli tas-sistema immuni, speċjalment il-limfoċiti tal-helper CD4 + T, għandhom rwol kritiku fil-patoġenesi ta 'l-awtoimmunità13. Is-sottogrupp Th17 skopert reċentement jipproduċi ċ-ċitokina proinflammatorja IL-17, jippromwovi l-espressjoni tal-chemokine, u jistimula ċelloli T f'organi bil-ħsara biex jipproduċu IFN-γ14. Iċ-ċelloli Th2 għandhom ukoll rwol uniku fil-patoġenesi tar-risponsi immuni. L-espressjoni ta 'IL-4 bħala ċellula Th2 rappreżentattiva tista' twassal għal konsegwenzi immunopatoloġiċi severi15.
Għalkemm saru ħafna studji kliniċi fuq MC16,17,18,18,19,20,21,22,23,24, għad hemm nuqqas ta 'mudelli sperimentali tal-annimali xierqa li jistgħu jimitaw il-proċess MC li spiss iseħħ fil-bnedmin u jista' jkun użat biex tinvestiga l-etjoloġija jew trattamenti ġodda bħal terapija mmirata. Sal-lum, ftit mudelli ta 'annimali biss ta' MC ġew irrappurtati li jistudjaw il-mekkaniżmi patoloġiċi sottostanti.
Ibbażat fuq it-teorija awtoimmuni proposta minn Albert u MA, dan l-istudju stabbilixxa mudell MC sempliċi u riproduċibbli mill-Autotransplanting NP ħdejn il-pjanċa tat-tarf vertebrali mtaqqba. Objettivi oħra huma li josservaw il-karatteristiċi istoloġiċi tal-mudelli tal-annimali u jevalwaw il-mekkaniżmi speċifiċi ta 'NP fl-iżvilupp ta' MC. Għal dan il-għan, nużaw tekniki bħall-bijoloġija molekulari, l-MRI, u studji istoloġiċi biex nistudjaw il-progressjoni ta 'MC.
Żewġ fniek mietu minħabba fsada waqt operazzjoni, u erba 'fniek mietu waqt l-anestesija waqt l-MRI. It-48 fniek li fadal baqgħu ħajjin u ma wrew l-ebda sinjali ta 'mġieba jew newroloġiċi wara l-operazzjoni.
L-MRI turi li l-intensità tas-sinjal tat-tessut inkorporat f'toqob differenti hija differenti. L-intensità tas-sinjal tal-korp vertebrali L5 fil-grupp NPE inbidlet gradwalment fi 12, 16 u 20 ġimgħa wara l-inserzjoni (sekwenza T1W wriet sinjal baxx, u s-sekwenza T2W wriet sinjal imħallat flimkien ma 'sinjal baxx) (Fig. 1C), waqt li d-dehriet tal-MRI Miż-żewġ gruppi l-oħra ta 'partijiet inkorporati baqgħu relattivament stabbli matul l-istess perjodu (Fig. 1a, b).
(A) MRIs sekwenzjali rappreżentattivi tas-sinsla tal-fenek lumbari fi 3 punti ta 'ħin. L-ebda anormalitajiet fis-sinjal ma nstabu fl-immaġini tal-grupp ta 'operazzjoni fittizja. (B) Il-karatteristiċi tas-sinjal tal-korp vertebrali fil-grupp ME huma simili għal dawk fil-grupp ta 'operazzjoni fittizja, u l-ebda bidla sinifikanti tas-sinjal ma hija osservata fis-sit tal-integrazzjoni maż-żmien. (C) Fil-grupp NPE, is-sinjal baxx huwa viżibbli b'mod ċar fis-sekwenza T1W, u s-sinjal imħallat u s-sinjal baxx huma viżibbli b'mod ċar fis-sekwenza T2W. Mill-perjodu ta '12 -il ġimgħa sal-perjodu ta '20 ġimgħa, is-sinjali għoljin sporadiċi li jdawru s-sinjali baxxi fis-sekwenza T2W jonqsu.
Iperplażja ovvja tal-għadam tista 'tidher fis-sit tal-impjantazzjoni tal-korp vertebrali fil-grupp NPE, u l-iperplażja tal-għadam isseħħ aktar malajr minn 12 sa 20 ġimgħa (Fig. 2C) meta mqabbel mal-grupp NPE, l-ebda bidla sinifikanti ma hija osservata fil-vertebrali mfassla korpi; Sham Group and Me Group (Fig. 2C) 2a, b).
(A) Il-wiċċ tal-ġisem vertebrali fil-porzjon impjantat huwa lixx ħafna, it-toqba tfejjaq sew, u m'hemm l-ebda iperplażja fil-ġisem vertebrali. (B) Il-forma tas-sit impjantat fil-grupp ME hija simili għal dik fil-grupp ta 'operazzjoni fittizja, u m'hemm l-ebda bidla ovvja fid-dehra tas-sit impjantat maż-żmien. (C) Iperplażja fl-għadam seħħet fis-sit impjantat fil-grupp NPE. L-iperplażja tal-għadam żdiedet malajr u saħansitra estiża mid-diska intervertebrali għall-korp vertebrali kontralaterali.
Analiżi istoloġika tipprovdi informazzjoni aktar dettaljata dwar il-formazzjoni tal-għadam. Il-Figura 3 turi r-ritratti tat-taqsimiet ta ’wara l-operazzjoni mtebbgħin bl-H & E. Fil-grupp ta 'operazzjoni fittizja, il-kondrociti kienu rranġati sew u ma nstabet l-ebda proliferazzjoni taċ-ċellula (Fig. 3A). Is-sitwazzjoni fil-grupp ME kienet simili għal dik fil-grupp ta 'operazzjoni fittizja (Fig. 3B). Madankollu, fil-grupp NPE, numru kbir ta 'kondrociti u proliferazzjoni ta' ċelloli simili għal NP ġew osservati fis-sit ta 'impjantazzjoni (Fig. 3C);
(A) Trabeculae jista 'jidher ħdejn il-pjanċa tat-tarf, il-kondrociti huma rranġati sewwa b'daqs u forma uniformi taċ-ċellula u mingħajr proliferazzjoni (40 darba). (B) Il-kundizzjoni tas-sit tal-impjantazzjoni fil-grupp ME hija simili għal dik tal-grupp fittizju. Trabeculae u kondrociti jistgħu jidhru, iżda m'hemm l-ebda proliferazzjoni ovvja fis-sit ta 'l-impjantazzjoni (40 darba). (B) Jista 'jidher li l-kondrociti u ċ-ċelloli simili għall-NP jipproliferaw b'mod sinifikanti, u l-forma u d-daqs tal-kondrociti huma irregolari (40 darba).
L-espressjoni ta 'interleukin 4 (IL-4) mRNA, interleukin 17 (IL-17) mRNA, u interferon γ (IFN-γ) mRNA ġew osservati kemm fil-gruppi NPE u ME. Meta tqabblu l-livelli ta 'espressjoni ta' ġeni fil-mira, l-espressjonijiet tal-ġeni ta 'IL-4, IL-17, u IFN-γ żdiedu b'mod sinifikanti fil-grupp NPE meta mqabbla ma' dawk tal-grupp ME u l-grupp ta 'operazzjoni fittizja (Fig. 4) (P <0.05). Meta mqabbel mal-grupp ta 'operazzjoni fittizja, il-livelli ta' espressjoni ta 'IL-4, IL-17, u IFN-γ fil-grupp ME żdiedu biss ftit u ma laħqux bidla statistika (p> 0.05).
L-espressjoni mRNA ta 'IL-4, IL-17 u IFN-γ fil-grupp NPE wriet xejra sinifikament ogħla minn dawk fil-grupp ta' operazzjoni fittizja u l-grupp ME (P <0.05).
B'kuntrast, il-livelli ta 'espressjoni fil-grupp ME ma wrew l-ebda differenza sinifikanti (p> 0.05).
L-analiżi tal-Western blot saret bl-użu ta 'antikorpi disponibbli kummerċjalment kontra IL-4 u IL-17 biex tikkonferma l-mudell ta' espressjoni mRNA mibdul. Kif muri fil-Figuri 5A, B, meta mqabbel mal-grupp ME u l-grupp ta 'operazzjoni fittizja, il-livelli ta' proteina ta 'IL-4 u IL-17 fil-grupp NPE żdiedu b'mod sinifikanti (p <0.05). Meta mqabbel mal-grupp ta 'operazzjoni fittizja, il-livelli ta' proteina ta 'IL-4 u IL-17 fil-grupp ME naqsu wkoll milli jilħqu bidliet statistikament sinifikanti (p> 0.05).
(A) Il-livelli ta 'proteina ta' IL-4 u IL-17 fil-grupp NPE kienu sinifikament ogħla minn dawk fil-grupp ME u fil-grupp tal-plaċebo (p <0.05). (B) Istogramma tal-Western blot.
Minħabba l-għadd limitat ta 'kampjuni umani miksuba waqt il-kirurġija, studji ċari u dettaljati dwar il-patoġenesi ta' MC huma kemmxejn diffiċli. Aħna ppruvajna nistabbilixxu mudell ta 'annimali ta' MC biex nistudjaw il-mekkaniżmi patoloġiċi potenzjali tiegħu. Fl-istess ħin, l-evalwazzjoni radjoloġika, l-evalwazzjoni istoloġika u l-evalwazzjoni bijoloġika molekulari ntużaw biex isegwu l-kors ta 'MC indott minn autograft NP. Bħala riżultat, il-mudell ta 'impjantazzjoni NP irriżulta f'bidla gradwali fl-intensità tas-sinjal minn punti ta' ħin ta '12-il ġimgħa sa 20 ġimgħa (sinjal baxx imħallat f'sekwenzi T1W u sinjal baxx fis-sekwenzi T2W), li jindika bidliet fit-tessuti, u l-istoloġiku u l-molekulari Evalwazzjonijiet bijoloġiċi kkonfermaw ir-riżultati tal-istudju radjoloġiku.
Ir-riżultati ta 'dan l-esperiment juru li seħħew bidliet viżwali u istoloġiċi fis-sit ta' ksur tal-ġisem vertebrali fil-grupp NPE. Fl-istess ħin, l-espressjoni tal-ġeni IL-4, IL-17 u IFN-γ, kif ukoll IL-4, IL-17 u IFN-γ ġew osservati, li jindikaw li l-ksur ta 'tessut awtologu tan-nukleu pulposus fil-vertebrali Korp jista 'jikkawża serje ta' sinjal u bidliet morfoloġiċi. Huwa faċli li ssib li l-karatteristiċi tas-sinjal tal-korpi vertebrali tal-mudell tal-annimali (sinjal baxx fis-sekwenza T1W, sinjal imħallat u sinjal baxx fis-sekwenza T2W) huma simili ħafna għal dawk taċ-ċelloli vertebrali umani, u l-karatteristiċi tal-MRI wkoll Ikkonferma l-osservazzjonijiet ta 'l-istoloġija u l-anatomija grossa, jiġifieri, il-bidliet fiċ-ċelloli tal-ġisem vertebrali huma progressivi. Għalkemm ir-rispons infjammatorju kkawżat minn trawma akuta jista 'jidher ftit wara t-titqib, ir-riżultati tal-MRI wrew li żieda progressivament bidliet fis-sinjal dehru 12-il ġimgħa wara t-titqib u ppersistew sa 20 ġimgħa mingħajr l-ebda sinjali ta' rkupru jew treġġigħ lura ta 'bidliet fl-MRI. Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li NP vertebrali awtologu huwa metodu affidabbli għall-istabbiliment ta 'MV progressiv fil-fniek.
Dan il-mudell ta 'titqib jirrikjedi ħila, ħin u sforz kirurġiku adegwat. F'esperimenti preliminari, dissezzjoni jew stimulazzjoni eċċessiva ta 'strutturi ligamentous paravertebrali jistgħu jirriżultaw fil-formazzjoni ta' osteofiti vertebrali. Għandha tingħata attenzjoni biex ma tagħmel ħsara jew tirrita d-diski li jmissu magħhom. Peress li l-fond tal-penetrazzjoni għandu jkun ikkontrollat biex jinkisbu riżultati konsistenti u riproduċibbli, aħna għamilna manwalment plug billi naqtgħu l-għant ta 'labra twila ta' 3 mm. L-użu ta 'dan il-plagg jiżgura fond tat-tħaffir uniformi fil-korp vertebrali. F'esperimenti preliminari, tliet kirurgi ortopediċi involuti fl-operazzjoni misjuba labar ta '16-il gauge aktar faċli biex jaħdmu ma' labar ta '18-il gauge jew metodi oħra. Biex tevita fsada eċċessiva waqt it-tħaffir, iżżomm il-labra għal ftit żmien tipprovdi toqba ta 'inserzjoni aktar adattata, li tissuġġerixxi li ċertu grad ta' MC jista 'jiġi kkontrollat b'dan il-mod.
Għalkemm ħafna studji mmiraw MC, ftit huwa magħruf dwar l-etjoloġija u l-patoġenesi ta 'MC25,26,27. Ibbażat fuq l-istudji preċedenti tagħna, sibna li l-awtoimmunità għandha rwol ewlieni fl-okkorrenza u l-iżvilupp ta 'MC12. Dan l-istudju eżamina l-espressjoni kwantitattiva ta 'IL-4, IL-17, u IFN-γ, li huma l-mogħdijiet ta' differenzjazzjoni ewlenin taċ-ċelloli CD4 + wara l-istimulazzjoni tal-antiġen. Fl-istudju tagħna, meta mqabbel mal-grupp negattiv, il-grupp NPE kellu espressjoni ogħla ta 'IL-4, IL-17, u IFN-γ, u l-livelli ta' proteina ta 'IL-4 u IL-17 kienu wkoll ogħla.
Klinikament, l-espressjoni ta 'mRNA IL-17 hija miżjuda f'ċelloli NP minn pazjenti b'diska ta' herniation28. Żieda fil-livelli ta 'espressjoni IL-4 u IFN-γ instabu wkoll f'mudell ta' herniation ta 'diska mhux kompressiva akuta meta mqabbel ma' kontrolli b'saħħithom29. IL-17 għandu rwol ewlieni fl-infjammazzjoni, korriment fit-tessut fil-mard awtoimmuni30 u jsaħħaħ ir-rispons immuni għal IFN-γ31. Ġie rrappurtat korriment tat-tessut medjat minn IL-17 fil-ġrieden MRL / LPR u ġrieden suxxettibbli għall-awtoimmunità. IL-4 jista 'jinibixxi l-espressjoni ta' ċitokini proinflamatorji (bħal IL-1β u TNFα) u attivazzjoni ta 'makrofaġi34. Ġie rrappurtat li l-espressjoni ta 'mRNA ta' IL-4 kienet differenti fil-grupp NPE meta mqabbel ma 'IL-17 u IFN-γ fl-istess ħin; L-espressjoni tal-mRNA ta 'IFN-γ fil-grupp NPE kienet sinifikament ogħla minn dik fil-gruppi l-oħra. Għalhekk, il-produzzjoni ta 'IFN-γ tista' tkun medjatur tar-rispons infjammatorju indott mill-interkalazzjoni NP. Studji wrew li IFN-γ huwa prodott minn tipi ta 'ċelloli multipli, inklużi ċelloli T attivati tat-tip 1, ċelloli qattiela naturali, u makrofaġi35,36, u huwa ċitokina pro-infjammatorja ewlenija li tippromwovi r-risponsi immuni37.
Dan l-istudju jissuġġerixxi li r-rispons awtoimmuni jista 'jkun involut fl-okkorrenza u l-iżvilupp ta' MC. Luoma et al. sabet li l-karatteristiċi tas-sinjal ta 'MC u NP prominenti huma simili fuq l-MRI, u t-tnejn juru sinjal għoli fis-sekwenza T2W38. Xi ċitokini ġew ikkonfermati li huma assoċjati mill-qrib ma 'l-okkorrenza ta' MC, bħal IL-139. Ma et al. issuġġerixxa li l-isporġenza 'l fuq jew' l isfel ta 'NP jista' jkollha influwenza kbira fuq l-okkorrenza u l-iżvilupp ta 'MC12. Bobechko40 u Herzbein et al.41 irrappurtaw li NP huwa tessut immunotolleranti li ma jistax jidħol fiċ-ċirkolazzjoni vaskulari mit-twelid. Sporrusions NP jintroduċu korpi barranin fil-provvista tad-demm, u b'hekk jimmedjaw reazzjonijiet awtoimmuni lokali42. Reazzjonijiet awtoimmuni jistgħu jikkawżaw numru kbir ta 'fatturi immuni, u meta dawn il-fatturi huma kontinwament esposti għat-tessuti, jistgħu jikkawżaw bidliet fis-sinjalazzjoni43. F'dan l-istudju, l-espressjoni żejda ta 'IL-4, IL-17 u IFN-γ huma fatturi immuni tipiċi, li juru aktar ir-relazzjoni mill-qrib bejn NP u MCS44. Dan il-mudell tal-annimali jimita sew l-avvanz tal-NP u d-dħul fil-pjanċa tat-tarf. Dan il-proċess kompla jiżvela l-impatt tal-awtoimmunità fuq MC.
Kif kien mistenni, dan il-mudell tal-annimali jagħtina pjattaforma possibbli biex nistudjaw MC. Madankollu, dan il-mudell għad għandu xi limitazzjonijiet: l-ewwelnett, matul il-fażi ta 'osservazzjoni ta' l-annimali, xi fniek fi stadju intermedju jeħtieġ li jiġu ewtanizzati għal ittestjar ta 'bijoloġija istoloġika u molekulari, u għalhekk xi annimali "jaqgħu barra" maż-żmien. It-tieni, għalkemm tliet punti ta 'ħin huma stabbiliti f'dan l-istudju, sfortunatament, aħna mmudellajna biss tip wieħed ta' MC (bidla tat-tip i modiku), u għalhekk mhuwiex biżżejjed biex tirrappreżenta l-proċess ta 'żvilupp tal-mard tal-bniedem, u hemm bżonn li jiġu ssettjati aktar punti ta' ħin Aħjar tosserva l-bidliet kollha tas-sinjal. It-tielet nett, il-bidliet fl-istruttura tat-tessut jistgħu tabilħaqq jintwerew b'mod ċar permezz ta 'tbajja istoloġika, iżda xi tekniki speċjalizzati jistgħu jiżvelaw aħjar il-bidliet mikrostrutturali f'dan il-mudell. Pereżempju, mikroskopija ħafifa polarizzata ntużat biex tanalizza l-formazzjoni ta 'fibrocartilage fid-diski intervertebrali tal-fenek45. L-effetti fit-tul ta 'NP fuq MC u endplate jeħtieġu aktar studju.
Erbgħa u ħamsin fniek bojod ta 'New Zealand maskili (piż ta' madwar 2.5-3 kg, età 3-3.5 xhur) ġew maqsuma bl-addoċċ fi grupp ta 'operazzjoni fittizja, grupp ta' impjantazzjoni tal-muskoli (grupp ME) u grupp ta 'impjantazzjoni tal-għeruq tan-nervituri (grupp NPE). Il-proċeduri sperimentali kollha ġew approvati mill-Kumitat tal-Etika ta 'l-Isptar Tianjin, u l-metodi sperimentali saru b'konformità stretta mal-linji gwida approvati.
Sar xi titjib għat-teknika kirurġika ta 'S. Sobajima 46. Kull fenek tqiegħed f'pożizzjoni laterali mill-ġdid u l-wiċċ ta 'qabel ta' ħames diski intervertebrali lumbari konsekuttivi (IVDs) kien espost bl-użu ta 'approċċ retroperitoneali posterolaterali. Kull fenek ingħata anestesija ġenerali (20% urethane, 5 ml / kg permezz tal-vina tal-widna). Inċiżjoni lonġitudinali tal-ġilda saret mit-tarf t'isfel tal-kustilji sax-xifer tal-pelvi, ventrali ta '2 cm għall-muskoli paravertebrali. L-ispina anterolaterali tal-lemin minn L1 sa L6 kienet esposta minn dissezzjoni qawwija u ċatta tat-tessut taħt il-ġilda ta 'taħt, tessut retroperitoneali, u muskoli (Fig. 6A). Il-livell tad-diska ġie determinat bl-użu tax-xifer tal-pelvi bħala monument anatomiku għal-livell tad-diska L5-L6. Uża labra ta 'titqib ta' 16-il gauge biex tħaffer toqba ħdejn il-pjanċa tat-tarf tal-vertebra L5 sa fond ta '3 mm (Fig. 6B). Uża siringa ta '5-ml biex taspira n-nukleu awtologu pulposus fid-diska intervertebrali L1-L2 (Fig. 6C). Neħħi n-nukleu pulposus jew muskolu skont ir-rekwiżiti ta 'kull grupp. Wara li t-toqba tat-tħaffir tkun approfondita, is-suturi assorbibbli jitpoġġew fuq il-fascia fil-fond, fascia superfiċjali u ġilda, waqt li tieħu ħsieb li ma tagħmilx ħsara lit-tessut periosteal tal-ġisem vertebrali waqt il-kirurġija.
(A) Id-diska L5-L6 hija esposta permezz ta 'approċċ retroperitoneali posterolaterali. (B) Uża labra ta '16 -il gauge biex tħaffer toqba ħdejn il-pjanċa L5. (C) L-MFs awtologi jinħasdu.
L-anestesija ġenerali ġiet amministrata b'20% urethane (5 ml / kg) amministrata permezz tal-vina tal-widna, u r-radjografiji tas-sinsla tad-dahar ġew ripetuti fi 12, 16, u 20 ġimgħa wara l-operazzjoni.
Il-fniek ġew sagrifikati permezz ta ’injezzjoni intramuskolari ta’ ketamina (25.0 mg / kg) u pentobarbital tas-sodju ġol-vini (1.2 g / kg) fi 12, 16 u 20 ġimgħa wara l-operazzjoni. L-ispina kollha tneħħiet għal analiżi istoloġika u twettqet analiżi reali. It-traskrizzjoni inversa kwantitattiva (RT-QPCR) u l-Western blotting intużaw biex jinstabu bidliet fil-fatturi immuni.
L-eżamijiet tal-MRI saru fil-fniek bl-użu ta 'kalamita klinika 3.0 T (GE Medical Systems, Firenze, SC) mgħammra b'riċevitur ortogonali tal-kolja tal-limb. Il-fniek ġew anestetizzati b'20% uretan (5 ml / kg) permezz tal-vina tal-widna u mbagħad poġġew 'il fuq fil-kalamita bir-reġjun tal-ġenbejn iċċentrat fuq coil tal-wiċċ ċirkulari b'dijametru ta' 5 pulzieri (GE Medical Systems). L-immaġini tal-lokalizzatur tal-koronali tat-T2 koronali (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) ġew akkwistati biex jiddefinixxu l-post tad-diska lumbari minn L3 - L4 sa L5 - L6. Flieli tal-Pjan Sagittali T2 ġew akkwistati bl-issettjar li ġej: sekwenza ta 'spin-eku mgħaġġel b'ħin ta' ripetizzjoni (TR) ta '2200 ms u ħin ta' eku (TE) ta '70 ms, matriċi; kamp viżiv ta '260 u tmien stimoli; Il-ħxuna tal-qtugħ kienet ta '2 mm, id-distakk kien ta' 0.2 mm.
Wara li ttieħdet l-aħħar ritratt u l-aħħar fenek inqatel, il-mistħija, inkorporat fil-muskoli, u diski NP tneħħew għal eżami istoloġiku. It-tessuti ġew iffissati f'10% ta 'formalin buffered newtrali għal ġimgħa, dekalċifikata bl-aċidu ethylenediaminetetraacetic, u paraffin sectioned. Il-blokki tat-tessuti ġew inkorporati fil-paraffin u maqtugħin f'sezzjonijiet sagittali (5 μm ħoxnin) bl-użu ta 'mikrotome. It-taqsimiet kienu mtebbgħin bl-ematoxilin u l-eosin (H&E).
Wara li nġabru d-diski intervertebrali mill-fniek f'kull grupp, l-RNA totali ġie estratt bl-użu ta 'kolonna UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., iċ-Ċina) skond l-istruzzjonijiet tal-manifattur u sistema ta' traskrizzjoni maqluba II (Promega Inc. , Madison, WI, USA). Twettqet traskrizzjoni bil-maqlub.
RT-QPCR twettqet bl-użu ta 'Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) u SYBR Green Jump Start taq Readymix (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, MO, USA) skond l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Il-volum ta 'reazzjoni ta' PCR kien ta '20 μL u kien fih 1.5 μL ta' cDNA dilwit u 0.2 μM ta 'kull primer. Il-primer ġew iddisinjati minn OligoperFect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) u manifatturati minn Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (iċ-Ċina) (Tabella 1). Intużaw il-kundizzjonijiet ta 'ċikliżmu termali li ġejjin: pass inizjali ta' attivazzjoni tal-polimerażi f'94 ° C għal 2 min, imbagħad 40 ċiklu ta '15 s kull wieħed f'94 ° C għad-denaturazzjoni tal-mudell, ttemprar għal 1 minuta f'60 ° C, estensjoni, u fluworexxenza. Il-kejl sar għal 1 minuta f'72 ° C. Il-kampjuni kollha ġew amplifikati tliet darbiet u l-valur medju ntuża għall-analiżi RT-QPCR. Id-dejta dwar l-amplifikazzjoni ġiet analizzata bl-użu ta 'FlexStation 3 (Apparat Molekulari, Sunnyvale, CA, USA). IL-4, IL-17, u Espressjoni tal-Ġene IFN-γ ġew normalizzati għall-kontroll endoġenu (ACTB). Livelli ta 'espressjoni relattiva ta' mRNA fil-mira ġew ikkalkulati bl-użu tal-metodu 2-ΔΔCT.
Proteina totali ġiet estratta minn tessuti bl-użu ta 'omoġenizzatur tat-tessut fil-buffer tal-lisi RIPA (li fih cocktail ta' protease u inibitur tal-fosfatasi) u mbagħad iċċentrifugat fi 13,000 rpm għal 20 minuta f'4 ° C biex jitneħħew il-fdalijiet tat-tessut. Ħamsin mikrogramma ta 'proteina ġew mgħobbija għal kull karreġġjata, separati b'10% SDS-PAGE, u mbagħad trasferiti għal membrana PVDF. L-imblukkar sar f'5% ħalib niexef mhux xaħam fil-melħ buffered Tris (TBS) li fih 0.1% Tween 20 għal 1 siegħa f'temperatura tal-kamra. Il-membrana ġiet inkubata bl-antikorp primarju kontra d-decoorin tal-fenek (dilwit 1: 200; Boster, Wuhan, iċ-Ċina) (dilwit 1: 200; Bioss, Beijing, iċ-Ċina) matul il-lejl f'4 ° C u rreaġixxa fit-tieni jiem; B'anticorp sekondarju (immunoglobulina kontra l-fenek tal-mogħża G f'1: 40,000 dilwizzjoni) flimkien ma 'perossidażi tal-horseradish (Boster, Wuhan, iċ-Ċina) għal siegħa f'temperatura tal-kamra. Is-sinjali tal-Western blot ġew innutati b'żieda fil-kimiluminesċenza fuq il-membrana kimiluminesċenti wara l-irradjazzjoni tar-raġġi X. Għal analiżi densitometrika, il-blots ġew skannjati u kwantifikati bl-użu ta 'softwer BandsCan u r-riżultati ġew espressi bħala l-proporzjon ta' immunoreattività tal-ġeni fil-mira għall-immunoreattività ta 'tubulina.
Saru kalkoli statistiċi bl-użu tal-pakkett tas-softwer SPSS16.0 (SPSS, USA). Id-dejta miġbura matul l-istudju ġiet espressa bħala medja ± devjazzjoni standard (medja ± SD) u analizzata bl-użu ta 'analiżi ta' miżuri ripetuti f'direzzjoni waħda ta 'varjanza (ANOVA) biex jiġu ddeterminati d-differenzi bejn iż-żewġ gruppi. P <0.05 kien ikkunsidrat statistikament sinifikanti.
Għalhekk, l-istabbiliment ta 'mudell ta' annimali ta 'MC billi jimplimenta NPs awtologi fil-korp vertebrali u jwettaq osservazzjoni makroanatomika, analiżi tal-MRI, evalwazzjoni istoloġika u analiżi bijoloġika molekulari jistgħu jsiru għodda importanti għall-valutazzjoni u l-fehim tal-mekkaniżmi ta' MC umani u l-iżvilupp ta 'terapewtiku ġdid interventi.
Kif tikkwota dan l-artikolu: Han, C. et al. Mudell ta 'annimali ta' bidliet modiċi ġie stabbilit billi jiġi impjantat nukleu awtologu pulposus fl-għadam subkondrali ta 'l-ispina lumbari. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038 / srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., u Boos, N. Ir-reżonanza manjetika ta 'l-ispina tal-ġenbejn: prevalenza ta' herniation u żamma tad-diska, kompressjoni tal-għeruq tan-nervituri, anormalitajiet tal-pjanċa tat-tarf, u osteoartrite konġunta tal-faċċata f'voluntiera bla sintomi. Jonqos rata. Radjoloġija 209, 661–666, doi: 10.1148 / radjoloġija.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, u Leboeuf-Eed, K. Bidliet Modic u r-relazzjoni tagħhom mas-sejbiet kliniċi. Ġurnal Ewropew tas-sinsla: Pubblikazzjoni Uffiċjali tas-Soċjetà Ewropea tas-sinsla, is-Soċjetà Ewropea tad-Deformità Spinali, u s-Soċjetà Ewropea għar-Riċerka tas-Spine Ċervikali 15, 1312–1319, doi: 10.1007 / S00586-006-0185-X (2006).
Kuisma, M., et al. Bidliet modiċi fil-pjanċi vertebrali lumbari: prevalenza u assoċjazzjoni ma 'uġigħ fid-dahar baxx u xjatika f'ħaddiema rġiel ta' età medja. Spine 32, 1116–1122, doi: 10.1097 / 01.Brs.0000261561.12944.ff (2007).
De Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., u Dalinka, M. MRI tal-mudullun jinbidel ħdejn il-pjanċa tat-tarf fil-marda deġenerattiva tas-sinsla tal-ġenbejn. Ajr. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214 / ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, u Carter, JR Marda Deġenerattiva tad-Diska: Evalwazzjoni tal-bidliet tal-mudullun vertebrali mal-MRI. Radjoloġija 166, 193–199, doi: 10.1148 / radjoloġija.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, u Carter, JR Imaging ta 'mard deġenerattiv tad-diska. Radjoloġija 168, 177–186, doi: 10.1148 / radjoloġija.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Tbassir tal-bidliet fis-sinjal tal-pjanċa neovertebrali (Modic) fil-popolazzjoni ġenerali. Ġurnal Ewropew tas-sinsla: Pubblikazzjoni Uffiċjali tas-Soċjetà Ewropea tas-sinsla, is-Soċjetà Ewropea tad-Deformità Spinali, u s-Soċjetà Ewropea għar-Riċerka dwar l-Ispina Ċervikali, Diviżjoni 19, 129–135, doi: 10.1007 / s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB u Mannisch, K. Modic jinbidel wara l-herniation tad-diska lumbari. Ġurnal Ewropew tas-sinsla: Pubblikazzjoni Uffiċjali tas-Soċjetà Ewropea tas-sinsla, is-Soċjetà Ewropea tad-Deformità Spinali u s-Soċjetà Ewropea għar-Riċerka tas-Spine Ċervikali 16, 977–982, doi: 10.1007 / S00586-007-0336-8 (2007).
Kertula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., u Kaapa, E. Il-bidliet tat-tip I modiku jistgħu jbassru deġenerazzjoni tad-diska deformazzjonali progressiva malajr: studju prospettiv ta 'sena. Ġurnal Ewropew tas-sinsla 21, 1135–1142, doi: 10.1007 / s00586-012-2147-9 (2012).
HU, ZJ, ZHAO, FD, FANG, XQ u FAN, Bidliet Modiċi SW: Kawżi possibbli u kontribuzzjoni għad-deġenerazzjoni tad-diska lumbari. Ipotesi Mediċi 73, 930–932, doi: 10.1016 / j.mehy.2009.06.038 (2009).
KROK, FREST DISC INTERNI HV. Problemi ta 'prolapse ta' diska 'l fuq minn 50 sena. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
POST ĦIN: 13-2024 ta 'Diċembru