Grazzi talli żort Nature.com. Il-verżjoni tal-browser li qed tuża għandha appoġġ limitat għal CSS. Għall-aħjar riżultati, nirrakkomandaw li tuża browser aktar ġdid (jew li tiddiżattiva l-mod ta' kompatibilità fl-Internet Explorer). Sadanittant, biex niżguraw appoġġ kontinwu, se nuru s-sit mingħajr stili u JavaScript.
L-istabbiliment ta 'mudelli ta' annimali ta 'bidla modika (MC) hija bażi importanti għall-istudju ta' MC. Erbgħa u ħamsin fniek abjad ta 'New Zealand ġew maqsuma fi grupp ta' operazzjoni finta, grupp ta 'impjantazzjoni tal-muskoli (grupp ME) u grupp ta' impjantazzjoni ta 'nukleus pulposus (grupp NPE). Fil-grupp NPE, id-diska intervertebrali kienet esposta b'approċċ kirurġiku anterolaterali lumbari u ntużat labra biex tittaqqab il-ġisem vertebrali L5 ħdejn il-pjanċa tat-tarf. NP ġie estratt mid-diska intervertebrali L1/2 permezz ta 'siringa u injettat fiha. Tħaffir ta 'toqba fl-għadam subkondrali. Il-proċeduri kirurġiċi u l-metodi tat-tħaffir fil-grupp ta 'impjantazzjoni tal-muskoli u l-grupp ta' operazzjoni finta kienu l-istess bħal dawk fil-grupp ta 'impjantazzjoni NP. Fil-grupp ME, biċċa muskolu tqiegħdet fit-toqba, filwaqt li fil-grupp ta 'operazzjoni sham, xejn ma tqiegħed fit-toqba. Wara l-operazzjoni, saru skanjar MRI u testijiet bijoloġiċi molekulari. Is-sinjal fil-grupp NPE inbidel, iżda ma kien hemm l-ebda bidla ovvja tas-sinjal fil-grupp ta 'operazzjoni finta u l-grupp ME. Osservazzjoni istoloġika wriet li l-proliferazzjoni anormali tat-tessut kienet osservata fis-sit tal-impjantazzjoni, u l-espressjoni ta 'IL-4, IL-17 u IFN-γ żdiedet fil-grupp NPE. L-impjantazzjoni ta 'NP fl-għadam subkondrali tista' tifforma mudell ta 'annimal ta' MC.
Bidliet modiċi (MC) huma leżjonijiet tal-plates tat-tarf vertebrali u l-mudullun li jmissu magħhom viżibbli fuq immaġini ta 'reżonanza manjetika (MRI). Huma pjuttost komuni f'individwi b'sintomi assoċjati1. Bosta studji enfasizzaw l-importanza tal-MC minħabba l-assoċjazzjoni tiegħu ma 'uġigħ fid-dahar baxx (LBP)2,3. de Roos et al.4 u Modic et al.5 b'mod indipendenti l-ewwel iddeskrivew tliet tipi differenti ta 'anormalitajiet tas-sinjali subkondrali fil-mudullun vertebrali. Bidliet modiċi tat-tip I huma ipointensi fuq sekwenzi peżati fuq T1 (T1W) u iperintensi fuq sekwenzi peżati fuq T2 (T2W). Din il-leżjoni tikxef pjanċi tat-tarf tax-xquq u tessut tal-granulazzjoni vaskulari maġenb il-mudullun. Bidliet tat-tip II Modic juru sinjal għoli kemm fuq is-sekwenzi T1W kif ukoll T2W. F'dan it-tip ta 'leżjoni, tista' tinstab il-qerda tal-pjanċa tat-tarf, kif ukoll is-sostituzzjoni istoloġika tax-xaħam tal-mudullun li jmiss. Bidliet tat-tip Modic III juru sinjal baxx fis-sekwenzi T1W u T2W. Ġew osservati leżjonijiet sklerotiċi li jikkorrispondu għall-endplates6. MC huwa meqjus bħala marda patoloġika tas-sinsla u huwa assoċjat mill-qrib ma 'ħafna mard deġenerattiv tas-sinsla7,8,9.
Meta wieħed iqis id-dejta disponibbli, bosta studji pprovdew għarfien dettaljat dwar l-etjoloġija u l-mekkaniżmi patoloġiċi tal-MC. Albert et al. issuġġerixxa li l-MC jista 'jkun ikkawżat minn ħernja tad-diska8. Hu et al. attribwit MC għal deġenerazzjoni severa tad-diska10. Kroc ippropona l-kunċett ta '"qsim tad-diska interna", li jiddikjara li trawma ripetittiva tad-diska tista' twassal għal mikrotiċrit fit-tarf. Wara l-formazzjoni tax-xquq, il-qerda tal-endplate min-nukleu pulposus (NP) tista 'tikkawża rispons awtoimmuni, li jkompli jwassal għall-iżvilupp ta' MC11. Ma et al. qasmu opinjoni simili u rrapportaw li l-awtoimmunità indotta minn NP għandha rwol ewlieni fil-patoġenesi ta 'MC12.
Iċ-ċelloli tas-sistema immuni, speċjalment il-limfoċiti CD4+ T helper, għandhom rwol kritiku fil-patoġenesi tal-awtoimmunità13. Is-sottosett Th17 skopert reċentement jipproduċi ċ-ċitokin proinfjammatorju IL-17, jippromwovi l-espressjoni tal-kimokini, u jistimula ċelluli T f'organi bil-ħsara biex jipproduċu IFN-γ14. Iċ-ċelloli Th2 għandhom ukoll rwol uniku fil-patoġenesi tar-risponsi immuni. L-espressjoni ta 'IL-4 bħala ċellula Th2 rappreżentattiva tista' twassal għal konsegwenzi immunopatoloġiċi severi15.
Għalkemm saru ħafna studji kliniċi fuq MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, għad hemm nuqqas ta’ mudelli sperimentali adattati fuq l-annimali li jistgħu jimitaw il-proċess MC li jseħħ ta’ spiss fil-bnedmin u li jista’ jkun użati biex jinvestigaw l-etjoloġija jew trattamenti ġodda bħal terapija mmirata. Sal-lum, ġew irrappurtati biss ftit mudelli ta 'annimali ta' MC biex jistudjaw il-mekkaniżmi patoloġiċi sottostanti.
Ibbażat fuq it-teorija awtoimmuni proposta minn Albert u Ma, dan l-istudju stabbilixxa mudell MC tal-fenek sempliċi u riproduċibbli billi awtotrapjant NP ħdejn il-pjanċa tat-tarf vertebrali mtaqqba. Għanijiet oħra huma li jiġu osservati l-karatteristiċi istoloġiċi tal-mudelli tal-annimali u jiġu evalwati l-mekkaniżmi speċifiċi tal-NP fl-iżvilupp tal-MC. Għal dan il-għan, nużaw tekniki bħal bijoloġija molekulari, MRI, u studji istoloġiċi biex nistudjaw il-progressjoni tal-MC.
Żewġ fniek mietu minn fsada waqt operazzjoni, u erba’ fniek mietu waqt anestesija waqt l-MRI. It-48 fenek li baqa’ baqgħu ħajjin u ma wrew l-ebda sinjali ta’ mġiba jew newroloġiċi wara l-kirurġija.
L-MRI turi li l-intensità tas-sinjal tat-tessut inkorporat f'toqob differenti hija differenti. L-intensità tas-sinjal tal-ġisem vertebrali L5 fil-grupp NPE inbidlet gradwalment fi 12, 16 u 20 ġimgħa wara l-inserzjoni (sekwenza T1W wriet sinjal baxx, u sekwenza T2W wriet sinjal imħallat flimkien ma 'sinjal baxx) (Fig. 1C), filwaqt li l-apparenza tal-MRI taż-żewġ gruppi l-oħra ta 'partijiet inkorporati baqgħu relattivament stabbli matul l-istess perjodu (Fig. 1A, B).
(A) MRIs sekwenzjali rappreżentattivi tas-sinsla tal-ġenbejn tal-fenek f'punti ta 'ħin 3. L-ebda anormalitajiet tas-sinjal ma nstabu fl-immaġini tal-grupp ta 'operazzjoni finta. (B) Il-karatteristiċi tas-sinjal tal-ġisem vertebrali fil-grupp ME huma simili għal dawk fil-grupp ta 'operazzjoni sham, u ma tiġi osservata l-ebda bidla sinifikanti tas-sinjal fis-sit tal-inkorporazzjoni matul iż-żmien. (C) Fil-grupp NPE, is-sinjal baxx huwa viżibbli b'mod ċar fis-sekwenza T1W, u s-sinjal imħallat u s-sinjal baxx huma viżibbli b'mod ċar fis-sekwenza T2W. Mill-perjodu ta '12-il ġimgħa sal-perjodu ta' 20 ġimgħa, is-sinjali għoljin sporadiċi madwar is-sinjali baxxi fis-sekwenza T2W jonqsu.
L-iperplażja tal-għadam ovvja tista 'tidher fis-sit tal-impjantazzjoni tal-ġisem vertebrali fil-grupp NPE, u l-iperplażja tal-għadam isseħħ aktar malajr minn 12 sa 20 ġimgħa (Fig. 2C) meta mqabbla mal-grupp NPE, ma tiġi osservata l-ebda bidla sinifikanti fil-mudell vertebrali mudellat korpi; Grupp Sham u grupp ME (Fig. 2C) 2A, B).
(A) Il-wiċċ tal-ġisem vertebrali fil-porzjon impjantat huwa lixx ħafna, it-toqba tfieq sew, u m'hemm l-ebda iperplażja fil-ġisem vertebrali. (B) Il-forma tas-sit impjantat fil-grupp ME hija simili għal dik fil-grupp ta 'operazzjoni sham, u m'hemm l-ebda bidla ovvja fid-dehra tas-sit impjantat maż-żmien. (C) L-iperplażja tal-għadam seħħet fis-sit impjantat fil-grupp NPE. L-iperplażja tal-għadam żdiedet malajr u saħansitra estiża permezz tad-diska intervertebrali għall-ġisem vertebrali kontralaterali.
L-analiżi istoloġika tipprovdi informazzjoni aktar dettaljata dwar il-formazzjoni tal-għadam. Il-Figura 3 turi r-ritratti tas-sezzjonijiet ta 'wara l-operazzjoni mtebbgħin b'H&E. Fil-grupp ta 'operazzjoni finta, il-chondrocytes kienu rranġati tajjeb u ma nstabet l-ebda proliferazzjoni taċ-ċelluli (Fig. 3A). Is-sitwazzjoni fil-grupp ME kienet simili għal dik fil-grupp ta 'operazzjoni finta (Fig. 3B). Madankollu, fil-grupp NPE, numru kbir ta 'kondroċiti u proliferazzjoni ta' ċelloli simili NP ġew osservati fis-sit tal-impjantazzjoni (Fig. 3C);
(A) Trabeculae jistgħu jidhru ħdejn il-pjanċa tat-tarf, il-kondroċiti huma rranġati pulit b'daqs u għamla uniformi taċ-ċelluli u l-ebda proliferazzjoni (40 darba). (B) Il-kundizzjoni tas-sit tal-impjantazzjoni fil-grupp ME hija simili għal dik tal-grupp sham. Trabeculae u chondrocytes jistgħu jidhru, iżda m'hemm l-ebda proliferazzjoni ovvja fis-sit tal-impjantazzjoni (40 darba). (B) Jista 'jidher li l-kondroċiti u ċ-ċelloli simili NP jipproliferaw b'mod sinifikanti, u l-għamla u d-daqs tal-kondroċiti huma irregolari (40 darba).
L-espressjoni ta 'interleukin 4 (IL-4) mRNA, interleukin 17 (IL-17) mRNA, u interferon γ (IFN-γ) mRNA kienu osservati kemm fil-gruppi NPE kif ukoll ME. Meta tqabblu l-livelli ta 'espressjoni tal-ġeni fil-mira, l-espressjonijiet tal-ġeni ta' IL-4, IL-17, u IFN-γ żdiedu b'mod sinifikanti fil-grupp NPE meta mqabbla ma 'dawk tal-grupp ME u l-grupp ta' operazzjoni sham (Fig. 4) (P <0.05). Meta mqabbel mal-grupp ta 'operazzjoni finta, il-livelli ta' espressjoni ta 'IL-4, IL-17, u IFN-γ fil-grupp ME żdiedu biss ftit u ma laħqux bidla statistika (P> 0.05).
L-espressjoni tal-mRNA ta 'IL-4, IL-17 u IFN-γ fil-grupp NPE wriet xejra ogħla b'mod sinifikanti minn dawk fil-grupp ta' operazzjoni finta u l-grupp ME (P <0.05).
B'kuntrast, il-livelli ta 'espressjoni fil-grupp ME wrew l-ebda differenza sinifikanti (P> 0.05).
Analiżi Western blot saret bl-użu ta 'antikorpi disponibbli kummerċjalment kontra IL-4 u IL-17 biex tikkonferma l-mudell ta' espressjoni mRNA mibdul. Kif muri fil-Figuri 5A, B, meta mqabbla mal-grupp ME u l-grupp ta 'operazzjoni sham, il-livelli ta' proteina ta 'IL-4 u IL-17 fil-grupp NPE żdiedu b'mod sinifikanti (P <0.05). Meta mqabbel mal-grupp ta 'operazzjoni finta, il-livelli ta' proteina ta 'IL-4 u IL-17 fil-grupp ME wkoll naqsu milli jilħqu bidliet statistikament sinifikanti (P> 0.05).
(A) Il-livelli ta 'proteini ta' IL-4 u IL-17 fil-grupp NPE kienu ogħla b'mod sinifikanti minn dawk fil-grupp ME u grupp plaċebo (P <0.05). (B) istogramma Western blot.
Minħabba n-numru limitat ta 'kampjuni umani miksuba waqt il-kirurġija, studji ċari u dettaljati dwar il-patoġenesi ta' MC huma kemmxejn diffiċli. Aħna ppruvajna nistabbilixxu mudell ta 'annimali ta' MC biex nistudjaw il-mekkaniżmi patoloġiċi potenzjali tiegħu. Fl-istess ħin, intużaw evalwazzjoni radjoloġika, evalwazzjoni istoloġika u valutazzjoni bijoloġika molekulari biex isegwu l-kors ta 'MC indott minn awtograft NP. Bħala riżultat, il-mudell ta 'impjantazzjoni NP irriżulta f'bidla gradwali fl-intensità tas-sinjal minn punti ta' żmien ta '12-il ġimgħa għal 20 ġimgħa (sinjal baxx imħallat f'sekwenzi T1W u sinjal baxx f'sekwenzi T2W), li jindika bidliet fit-tessuti, u l-istoloġiċi u molekulari. evalwazzjonijiet bijoloġiċi kkonfermaw ir-riżultati tal-istudju radjoloġiku.
Ir-riżultati ta 'dan l-esperiment juru li bidliet viżwali u istoloġiċi seħħew fis-sit tal-ksur tal-ġisem vertebrali fil-grupp NPE. Fl-istess ħin, l-espressjoni tal-ġeni IL-4, IL-17 u IFN-γ, kif ukoll IL-4, IL-17 u IFN-γ ġew osservati, li jindikaw li l-ksur tat-tessut awtologu tan-nukleu pulposus fil-vertebri ġisem jista 'jikkawża serje ta' sinjal u bidliet morfoloġiċi. Huwa faċli li ssib li l-karatteristiċi tas-sinjali tal-korpi vertebrali tal-mudell tal-annimali (sinjal baxx fis-sekwenza T1W, sinjal imħallat u sinjal baxx fis-sekwenza T2W) huma simili ħafna għal dawk taċ-ċelloli vertebrali umani, u l-karatteristiċi tal-MRI wkoll tikkonferma l-osservazzjonijiet tal-istoloġija u l-anatomija grossa, jiġifieri, il-bidliet fiċ-ċelloli tal-ġisem vertebrali huma progressivi. Għalkemm ir-rispons infjammatorju ikkawżat minn trawma akuta jista 'jidher ftit wara t-titqib, ir-riżultati tal-MRI wrew li l-bidliet tas-sinjali li qed jiżdiedu b'mod progressiv dehru 12-il ġimgħa wara t-titqib u baqgħu jippersistu sa ġimgħa 20 mingħajr ebda sinjali ta' rkupru jew treġġigħ lura tal-bidliet tal-MRI. Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li NP vertebrali awtologu huwa metodu affidabbli biex jiġi stabbilit MV progressiv fil-fniek.
Dan il-mudell tat-titqib jeħtieġ ħila, ħin u sforz kirurġiku adegwati. F'esperimenti preliminari, dissezzjoni jew stimulazzjoni eċċessiva tal-istrutturi ligamentous paravertebrali jistgħu jirriżultaw fil-formazzjoni ta 'osteophytes vertebrali. Għandha tingħata attenzjoni biex ma ssirx ħsara jew tirrita d-diski maġenbhom. Peress li l-fond tal-penetrazzjoni għandu jkun ikkontrollat biex jinkisbu riżultati konsistenti u riproduċibbli, għamilna plagg manwalment billi nqattgħu l-għant ta 'labra twila 3 mm. L-użu ta 'dan il-plagg jiżgura fond uniformi tat-tħaffir fil-ġisem vertebrali. F'esperimenti preliminari, tliet kirurgi ortopediċi involuti fl-operazzjoni sabu labar ta 'gauge 16 eħfef biex jaħdmu ma' labar ta 'gauge 18 jew metodi oħra. Biex tevita fsada eċċessiva waqt it-tħaffir, iż-żamma tal-labra kwieta għal ftit se tipprovdi toqba ta 'inserzjoni aktar xierqa, li tissuġġerixxi li ċertu grad ta' MC jista 'jiġi kkontrollat b'dan il-mod.
Għalkemm ħafna studji mmirati lejn MC, ftit huwa magħruf dwar l-etjoloġija u l-patoġenesi ta 'MC25,26,27. Ibbażat fuq l-istudji preċedenti tagħna, sibna li l-awtoimmunità għandha rwol ewlieni fl-okkorrenza u l-iżvilupp ta 'MC12. Dan l-istudju eżamina l-espressjoni kwantitattiva ta 'IL-4, IL-17, u IFN-γ, li huma l-mogħdijiet ewlenin ta' differenzjazzjoni taċ-ċelloli CD4 + wara stimulazzjoni ta 'antiġen. Fl-istudju tagħna, meta mqabbel mal-grupp negattiv, il-grupp NPE kellu espressjoni ogħla ta 'IL-4, IL-17, u IFN-γ, u l-livelli ta' proteina ta 'IL-4 u IL-17 kienu wkoll ogħla.
Klinikament, l-espressjoni tal-mRNA ta 'IL-17 tiżdied fiċ-ċelloli NP minn pazjenti b'ħernja tad-diska28. Livelli ta 'espressjoni ta' IL-4 u IFN-γ miżjuda nstabu wkoll f'mudell akut ta 'ħernja tad-diska mhux kompressiva meta mqabbel ma' kontrolli b'saħħithom29. IL-17 għandu rwol ewlieni fl-infjammazzjoni, ħsara fit-tessuti f'mard awtoimmuni30 u ssaħħaħ ir-rispons immuni għal IFN-γ31. Ġie rrapportat ħsara fit-tessut medjata minn IL-17 mtejba fi ġrieden MRL/lpr32 u ġrieden suxxettibbli għall-awtoimmunità33. IL-4 jista 'jinibixxi l-espressjoni ta' ċitokini proinfjammatorji (bħal IL-1β u TNFα) u l-attivazzjoni tal-makrofagi34. Ġie rrappurtat li l-espressjoni tal-mRNA ta 'IL-4 kienet differenti fil-grupp NPE meta mqabbla ma' IL-17 u IFN-γ fl-istess ħin; L-espressjoni tal-mRNA ta 'IFN-γ fil-grupp NPE kienet ogħla b'mod sinifikanti minn dik fil-gruppi l-oħra. Għalhekk, il-produzzjoni ta 'IFN-γ tista' tkun medjatur tar-rispons infjammatorju indott mill-interkalazzjoni NP. Studji wrew li IFN-γ huwa prodott minn tipi multipli ta 'ċelluli, inklużi ċelluli T helper tat-tip 1 attivati, ċelluli naturali killer, u makrofaġi35,36, u huwa ċitokin pro-infjammatorju ewlieni li jippromwovi risponsi immuni37.
Dan l-istudju jissuġġerixxi li r-rispons awtoimmuni jista 'jkun involut fl-okkorrenza u l-iżvilupp ta' MC. Luoma et al. sabet li l-karatteristiċi tas-sinjal ta 'MC u NP prominenti huma simili fuq MRI, u t-tnejn juru sinjal għoli fis-sekwenza T2W38. Xi ċitokini ġew ikkonfermati li huma assoċjati mill-qrib ma 'l-okkorrenza ta' MC, bħal IL-139. Ma et al. issuġġerixxa li l-isporġenza 'l fuq jew 'l isfel ta' NP jista 'jkollha influwenza kbira fuq l-okkorrenza u l-iżvilupp ta' MC12. Bobechko40 u Herzbein et al.41 irrappurtaw li NP huwa tessut immunotolleranti li ma jistax jidħol fiċ-ċirkolazzjoni vaskulari mit-twelid. Il-protrużjonijiet NP jintroduċu korpi barranin fil-provvista tad-demm, u b'hekk jimmedjaw reazzjonijiet awtoimmuni lokali42. Reazzjonijiet awtoimmuni jistgħu jinduċu numru kbir ta 'fatturi immuni, u meta dawn il-fatturi jkunu esposti kontinwament għat-tessuti, jistgħu jikkawżaw bidliet fis-sinjalar43. F'dan l-istudju, l-espressjoni żejda ta 'IL-4, IL-17 u IFN-γ huma fatturi immuni tipiċi, li jipprovaw aktar ir-relazzjoni mill-qrib bejn NP u MCs44. Dan il-mudell tal-annimal jimita sew il-breakthrough NP u d-dħul fil-pjanċa tat-tarf. Dan il-proċess kompla żvela l-impatt tal-awtoimmunità fuq MC.
Kif mistenni, dan il-mudell tal-annimali jipprovdilna pjattaforma possibbli biex nistudjaw l-MC. Madankollu, dan il-mudell għad għandu xi limitazzjonijiet: l-ewwelnett, matul il-fażi ta 'osservazzjoni ta' l-annimali, xi fniek ta 'stadju intermedju jeħtieġ li jiġu ewtanizzati għall-ittestjar istoloġiku u tal-bijoloġija molekulari, u għalhekk xi annimali "ma jibqgħux jintużaw" maż-żmien. It-tieni nett, għalkemm tliet punti ta 'żmien huma stabbiliti f'dan l-istudju, sfortunatament, aħna mmudellaw biss tip wieħed ta' MC (Modic tip I bidla), għalhekk mhuwiex biżżejjed li tirrappreżenta l-proċess ta 'żvilupp tal-mard tal-bniedem, u aktar punti ta' żmien jeħtieġ li jiġu stabbiliti biex osserva aħjar il-bidliet kollha tas-sinjal. It-tielet nett, il-bidliet fl-istruttura tat-tessut jistgħu tabilħaqq jintwerew b'mod ċar permezz ta 'tbajja' istoloġika, iżda xi tekniki speċjalizzati jistgħu jiżvelaw aħjar il-bidliet mikrostrutturali f'dan il-mudell. Pereżempju, il-mikroskopija tad-dawl polarizzat intużat biex tanalizza l-formazzjoni tal-fibrocartilage fid-diski intervertebrali tal-fenek45. L-effetti fit-tul ta 'NP fuq MC u endplate jeħtieġu aktar studju.
Erbgħa u ħamsin fniek bojod maskili ta 'New Zealand (piż madwar 2.5-3 kg, età 3-3.5 xhur) ġew maqsuma b'mod każwali fi grupp ta' operazzjoni finta, grupp ta 'impjantazzjoni tal-muskoli (grupp ME) u grupp ta' impjantazzjoni ta 'għeruq tan-nervituri (grupp NPE). Il-proċeduri sperimentali kollha ġew approvati mill-Kumitat tal-Etika tal-Isptar ta 'Tianjin, u l-metodi sperimentali twettqu f'konformità stretta mal-linji gwida approvati.
Sar xi titjib fit-teknika kirurġika ta 'S. Sobajima 46 . Kull fenek tqiegħed f'pożizzjoni mimduda laterali u l-wiċċ ta 'quddiem ta' ħames diski intervertebrali lumbari konsekuttivi (IVDs) kien espost bl-użu ta 'approċċ retroperitoneali posterolaterali. Kull fenek ingħata anestesija ġenerali (20% urethane, 5 ml/kg permezz tal-vina tal-widna). Saret inċiżjoni lonġitudinali tal-ġilda mit-tarf t'isfel tal-kustilji sax-xifer pelviku, 2 ċm ventrali għall-muskoli paravertebrali. Is-sinsla anterolaterali tal-lemin minn L1 sa L6 kienet esposta permezz ta 'dissezzjoni li jaqtgħu u ċatt tat-tessut ta' taħt il-ġilda, tat-tessut retroperitoneali u tal-muskoli ta 'fuq il-wiċċ (Fig. 6A). Il-livell tad-diska ġie determinat bl-użu tax-xifer pelviku bħala punt ta 'riferiment anatomiku għal-livell tad-diska L5-L6. Uża labra ta 'titqib ta' 16-il gauge biex tħaffer toqba ħdejn il-pjanċa tat-tarf tal-vertebra L5 sa fond ta '3 mm (Fig. 6B). Uża siringa ta' 5 ml biex taspira n-nukleu pulposus awtologu fid-diska intervertebrali L1-L2 (Fig. 6C). Neħħi n-nukleu pulposus jew il-muskolu skont ir-rekwiżiti ta 'kull grupp. Wara li t-toqba tat-tħaffir tiġi approfondita, suturi assorbibbli jitqiegħdu fuq il-fascia profonda, il-fascia superfiċjali u l-ġilda, filwaqt li tieħu ħsieb li ma ssirx ħsara lit-tessut perjosteali tal-ġisem vertebrali waqt il-kirurġija.
(A) Id-diska L5-L6 hija esposta permezz ta 'approċċ retroperitoneali posterolaterali. (B) Uża labra ta 'gauge 16 biex tħaffer toqba ħdejn it-tarf L5. (C) MFs awtologi huma maħsuda.
Anestesija ġenerali ngħatat b'20% urethane (5 ml/kg) mogħti permezz tal-vina tal-widna, u radjografiji tas-sinsla tal-ġenbejn ġew ripetuti fi 12, 16, u 20 ġimgħa wara l-operazzjoni.
Il-fniek ġew sagrifikati b'injezzjoni ġol-muskoli ta' ketamina (25.0 mg/kg) u pentobarbital tas-sodju ġol-vini (1.2 g/kg) fi 12, 16 u 20 ġimgħa wara l-kirurġija. Is-sinsla kollha tneħħiet għal analiżi istoloġika u saret analiżi reali. Traskrizzjoni inversa kwantitattiva (RT-qPCR) u Western blotting intużaw biex jinstabu bidliet fil-fatturi immuni.
L-eżamijiet tal-MRI saru fil-fniek bl-użu ta 'kalamita klinika 3.0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) mgħammra b'riċevitur ortogonali tal-coil tal-limb. Il-fniek ġew anestetizzati b'20% urethane (5 mL/kg) permezz tal-vina tal-widna u mbagħad imqiegħda supina fi ħdan il-kalamita bir-reġjun lumbari ċċentrata fuq coil tal-wiċċ ċirkolari ta 'dijametru ta' 5 pulzieri (GE Medical Systems). L-immaġini tal-lokalizzatur koronali T2-weighted (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) ġew akkwistati biex jiddefinixxu l-post tad-diska lumbari minn L3-L4 sa L5-L6. Flieli peżati fuq il-pjan saġitali T2 ġew akkwistati bis-settings li ġejjin: sekwenza ta 'spin-echo mgħaġġla b'ħin ta' ripetizzjoni (TR) ta '2200 ms u ħin ta' eku (TE) ta '70 ms, matriċi; kamp viżwali ta '260 u tmien stimuli; Il-ħxuna tat-tqattigħ kienet 2 mm, id-distakk kien 0.2 mm.
Wara li ttieħed l-aħħar ritratt u l-aħħar fenek inqatel, id-diski sham, inkorporati fil-muskoli, u NP tneħħew għal eżami istoloġiku. It-tessuti ġew iffissati f'formalin buffered newtrali ta '10% għal ġimgħa 1, dekalċifikati bl-aċidu ethylenediaminetetraacetic, u paraffin sezzjoni. Blokki tat-tessuti ġew inkorporati fil-paraffin u maqtugħin f'sezzjonijiet sagittali (5 μm ħxuna) bl-użu ta 'mikrotomu. Is-sezzjonijiet kienu mtebbgħin b'ematossilin u eosina (H&E).
Wara li ġabar id-diski intervertebrali mill-fniek f'kull grupp, l-RNA totali ġie estratt bl-użu ta 'kolonna UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., China) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur u sistema ta' traskrizzjoni inversa ImProm II (Promega Inc. , Madison, WI, l-Istati Uniti). Twettqet traskrizzjoni inversa.
RT-qPCR twettqet bl-użu ta 'Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) u SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Il-volum ta 'reazzjoni PCR kien 20 μl u kien fih 1.5 μl ta' cDNA dilwit u 0.2 μM ta 'kull primer. Primers ġew iddisinjati minn OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) u manifatturati minn Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Ċina) (Tabella 1). Intużaw il-kundizzjonijiet ta 'ċikliżmu termali li ġejjin: pass inizjali ta' attivazzjoni tal-polimerażi f'94 ° C għal 2 min, imbagħad 40 ċiklu ta '15 s kull wieħed f'94 ° C għal denaturazzjoni tal-mudell, ittemprar għal 1 min f'60 ° C, estensjoni u fluworexxenza. kejl twettqu għal 1 min f'72 ° C. Il-kampjuni kollha ġew amplifikati tliet darbiet u l-valur medju intuża għall-analiżi RT-qPCR. Id-dejta tal-amplifikazzjoni ġiet analizzata bl-użu ta' FlexStation 3 (Apparat Molekulari, Sunnyvale, CA, USA). L-espressjoni tal-ġeni IL-4, IL-17, u IFN-γ ġew normalizzati għall-kontroll endoġenu (ACTB). Livelli ta 'espressjoni relattiva ta' mRNA fil-mira ġew ikkalkulati bl-użu tal-metodu 2-ΔΔCT.
Il-proteina totali ġiet estratta mit-tessuti bl-użu ta 'omoġenizzatur tat-tessuti f'RIPA lysis buffer (li fih cocktail ta' inibitur ta 'protease u phosphatase) u mbagħad ċentrifugati f'13,000 rpm għal 20 min f'4 ° C biex jitneħħew debris tat-tessuti. Ħamsin mikrogramma ta 'proteina ġew mgħobbija għal kull korsija, separati b'10% SDS-PAGE, u mbagħad trasferiti għal membrana PVDF. L-imblukkar sar f'5% ħalib niexef mingħajr xaħam f'salina b'Tris-buffered (TBS) li kien fih 0.1% Tween 20 għal siegħa f'temperatura tal-kamra. Il-membrana ġiet inkubata b'antikorp primarju anti-decorin tal-fenek (dilwit 1:200; Boster, Wuhan, iċ-Ċina) (dilwit 1:200; Bioss, Beijing, iċ-Ċina) matul il-lejl f'4 ° C u rreaġixxa fit-tieni jiem; b'antikorp sekondarju (immunoglobulina G tal-mogħoż kontra l-fenek f'dilwizzjoni ta '1:40,000) flimkien ma' perossidasi tar-ravanell (Boster, Wuhan, iċ-Ċina) għal siegħa f'temperatura tal-kamra. Sinjali tal-Western blot ġew skoperti permezz ta 'kimiluminixxenza miżjuda fuq il-membrana kemiluminixxenti wara irradjazzjoni tar-raġġi X. Għal analiżi densitometrika, blots ġew skennjati u kkwantifikati bl-użu ta 'softwer BandScan u r-riżultati ġew espressi bħala l-proporzjon tal-immunoreattività tal-ġene fil-mira għall-immunoreattività tat-tubulina.
Kalkoli statistiċi saru bl-użu tal-pakkett tas-softwer SPSS16.0 (SPSS, USA). Id-dejta miġbura matul l-istudju ġiet espressa bħala medja ± devjazzjoni standard (medja ± SD) u analizzata bl-użu ta 'analiżi tal-varjanza ta' miżuri ripetuti f'direzzjoni waħda (ANOVA) biex tiddetermina d-differenzi bejn iż-żewġ gruppi. P <0.05 kien ikkunsidrat statistikament sinifikanti.
Għalhekk, l-istabbiliment ta’ mudell ta’ annimal ta’ MC billi jiġu impjantati NPs awtologi fil-ġisem vertebrali u jwettqu osservazzjoni makroanatomika, analiżi MRI, evalwazzjoni istoloġika u analiżi bijoloġika molekulari jistgħu jsiru għodda importanti għall-valutazzjoni u l-fehim tal-mekkaniżmi tal-MC tal-bniedem u l-iżvilupp terapewtiku ġdid. interventi.
Kif tikkwota dan l-artikolu: Han, C. et al. Ġie stabbilit mudell ta 'annimali ta' bidliet Modic billi impjantaw nukleu pulposus awtologu fl-għadam subkondrali tas-sinsla lumbari. Sci. Rep 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., u Boos, N. Immaġini ta 'reżonanza manjetika tas-sinsla tal-ġenbejn: prevalenza ta' ftuq u żamma tad-diska, kompressjoni tal-għeruq tan-nervituri, anormalitajiet tal-pjanċa tat-tarf, u osteoartrite tal-ġogi tal-aspetti f'voluntiera mingħajr sintomi . rata. Radjoloġija 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, u Leboeuf-Eed, K. Modic bidliet u r-relazzjoni tagħhom mas-sejbiet kliniċi. European Spine Journal: pubblikazzjoni uffiċjali tas-Soċjetà Ewropea tas-Sinsla, is-Soċjetà Ewropea tad-Deformità tas-Sinsla, u s-Soċjetà Ewropea għar-Riċerka tas-Sinsla Ċervikali 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Bidliet modiċi fit-tarf tal-vertebri lumbari: prevalenza u assoċjazzjoni ma 'uġigħ fid-dahar baxx u xjatika f'ħaddiema rġiel ta' età medja. Sinsla 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., u Dalinka, M. MRI tal-mudullun jinbidel ħdejn il-pjanċa tat-tarf f'mard deġenerattiv tas-sinsla lumbari. AJR. Ġurnal Amerikan tar-Radjoloġija 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, u Carter, JR Mard deġenerattiv tad-diska: evalwazzjoni tal-bidliet tal-mudullun vertebrali bl-MRI. Radjoloġija 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, u Carter, JR Immaġini ta 'mard deġenerattiv tad-diska. Radjoloġija 168, 177-186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Tbassir ta 'bidliet fis-sinjal ta' l-endplate neovertebrali (Modic) fil-popolazzjoni ġenerali. European Spine Journal: Pubblikazzjoni Uffiċjali tas-Soċjetà Ewropea tas-Sinsla, is-Soċjetà Ewropea tad-Deformità tas-Sinsla, u s-Soċjetà Ewropea għar-Riċerka tas-Sinsla Ċervikali, Diviżjoni 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB u Mannisch, K. Modic bidliet wara ħernja tad-diska lumbari. European Spine Journal : Pubblikazzjoni Uffiċjali tas-Soċjetà Ewropea tas-Sinsla, is-Soċjetà Ewropea tad-Deformità tas-Sinsla u s-Soċjetà Ewropea għar-Riċerka tas-Sinsla Ċervikali 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., u Kaapa, E. Modic tip I bidliet jistgħu jbassru deġenerazzjoni tad-diska deformazzjoni progressiva malajr: studju prospettiv ta 'sena. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ u Fan, SW Modic bidliet: kawżi possibbli u kontribut għad-deġenerazzjoni tad-diska lumbari. Ipotesi Mediċi 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Qtugħ tad-diska interna. Problemi tal-prolapse tad-diska fuq 50 sena. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Ħin tal-post: Diċ-13-2024